细胞凋亡形态学检测试剂盒

库存 ：58

英文名 ：Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：有效期12个月。

供应商 ：上海莼试

保存条件 ：RT,避光

规格 ：100T

参数规格:

产品名称	细胞凋亡形态学检测试剂盒
英文名称	Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit
货号	CS-X10526

中文名称：细胞凋亡形态学检测试剂盒
英文名称：Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit
产品规格：100T
形态学检测是研究细胞凋亡的最基本方法。细胞凋亡的形态学变化是多阶段的，起初，细胞间连接和微绒毛消失，细胞体积缩小，胞浆凝缩，内质网变疏松并与胞膜融合，形成一个个空泡，核糖体与线粒体等细胞器聚集，结构尚无明显改变，细胞核内的染色质逐渐凝聚成新月状附在核膜周边，细胞核固缩呈均一的致密物，进而断裂成碎块，此时细胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不断出芽、脱落，一个细胞变成数个大小不等的有膜包裹的凋亡小体：最后凋亡小体被周围具有吞噬能力的细胞吞噬、消化。上述这些形态学的变化，可以通过本试剂盒中的染色及光学显微镜观察。
计算细胞凋亡率和死亡率：
细胞凋亡率=凋亡细胞/细胞总数×100%
细胞死亡率=坏死细胞/细胞总数×100%
储存：RT,避光，有效期12个月。
注意事项：
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
产品特点：
1.细胞凋亡形态学检测试剂盒离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方，将溶胶和结合两种功能统一，因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况，节省了需购买多种试剂盒的费用，
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
 1--3-氧Imatinib (tyrosine kinase inhibitor)
 砷铅(II)Imatinib, mesylate Salt (tyrosine kinase inhibitor)
 5-降-2,3-二羧一酯Navitoclax(ABT-263) (Bcl-2/Bcl-xL inhibitor)
 2-异烟肼Paclitaxel (Taxol) (tubulin polymerization promoter and microtubule polymer stabilizer)
 3--4-酯Roscovitine (Seliciclib, CYC202) (broad cdks inhibitor)
 1-氧螺[2.5]辛-2-腈TAMOXIFEN CITRATE(Nolvadex) (estrogen receptor modulator)
 3-邻二YC-1 (soluble guanylyl cyclase (sGC) activator)
 2-溴-4-羟啶YM155 (survivin inhibitor)
 甘酰-L-12-Deoxyphorbol 13-phenylacate 20-acetate(dPPA) (PKC β activator)
 (-)-二-2,3-邻异亚-L-酯JK184 (SHH antagonist)
细胞凋亡形态学检测试剂盒4-溴酰 4-Bromobenzenesulfonyl Chloride >98.0%(T)度≥98.0%P53(wt-p53
4-溴-N,N-二 4-Bromo-N,N-dimethylaniline >97.0%(GC)度≥98%P63 protein  P63 肿瘤抑制（抗原
4-溴-N,N-二 4-Bromo-N,N-dimethylaniline >97.0%(GC)度≥97%p70 S6 Kinase/P70 Beta1  p70S6Kb抗原
4-溴-DL-扁桃 4-Bromo-DL-mandelic Acid >99.0%(T)度≥97%P73 protein  P73肿瘤抑制抗原
4-脱哆醇盐盐 DEOXYPYRIDOXINE HCL, 4-(RG)度≥97%PACAP receptor-I  腺苷环化酶激活肽受体（抗原
4-叔醇(顺反异构体混和物) 4-tert-Butylcyclohexanol (cis- and trans- mixture)>98.0%(GC)度≥98%PACAP(1-38 Peptide
4-叔醇(顺反异构体混和物) 4-tert-Butylcyclohexanol (cis- and trans- mixture)>98.0%(GC)度≥98%PACAP(6-38 Peptide
4-叔 4-tert-Butylpyridine >96.0%(GC&T)度≥97%PACAP/VIP receptor  腺苷环化酶激活肽/血管活性肠肽受体（抗原
茴三Fennel three sulfur保存20℃，避光规格100mg
非普拉宗Feprazone保存20℃，避光规格50mg
杨酰Salicylamide保存20℃，避光规格100mg
盐拉贝洛尔Labetalol hydrochloride保存20℃，避光规格100mg
盐吗啉胍Moroxydine Hydrochloride保存20℃，避光规格100mg
保泰松Phenylbutazone保存20℃，避光规格100mg
无水二Two sodium hydrogen phosphate anhydrous保存20℃，避光规格100mg
溴东莨菪Scopolamine Methobromide保存20℃，避光规格50mg
盐环仑特罗Ring Lun clenbuterol hydrochloride保存20℃，避光规格50mg
盐妥洛特罗Tulobuterol hydrochloride保存20℃，避光规格50mg
溴肽林Propantheline bromide保存20℃，避光规格50mg
柠檬Limonene保存20℃，避光规格200mg
尿嘧啶Uracil保存20℃，避光规格50mg
替加Tegafur保存20℃，避光规格50mg
吗多明Molsidomine保存20℃，避光规格100mg