细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)

库存 ：47

英文名 ：详见说明书

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：有效期一年

供应商 ：上海莼试

保存条件 ：-20℃避光保存

规格 ：详见说明书

参数规格:

产品名称	细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)
英文名称
货号	CSX9783

中文名称：细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)
英文名称：
产品规格：20T
发货周期：1～3天
保存条件：20℃冰冻保存一年。
工作原理：
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或DNA 被切割，出现单链或双链缺口，并产生与 DNA 断点数目相同的3’OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将高辛标记的dUTP(DIGdUTP)标记至 3’OH 末端，DIGdUTP 结合在 DNA 断点部位，可以通过生物标记的抗高辛抗体(AntiDIGBiotin)反应后，再结合链酶亲和素荧光素 FITC(SABCFITC)。FITC 在 490495nm 激化，在 520530nm 发射荧光，呈黄绿色。凋亡的细包核呈黄绿色，从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
试剂盒内容：
1．标记缓冲液(Labeling Buffer)1ml
2．末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3．DIGdUTP(×20)20μl
4．封闭液(Blocking Reagent)4ml
5．生物素化抗高辛抗体(× 100)20μl
6．SABCFITC(× 100)20μl
7．Proteinase K(×200)50μl
8．抗体稀释液 4ml
注意事项：
1. 细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方，将溶胶和结合两种功能统一，因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况，节省了需购买多种试剂盒的费用，
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
PACAP(138 Peptide)phosphoVAV3(Tyr173)GTP酶IMAP家族成员4抗体
MBP(Myelin Basic Protein, MBP 6886)VEGFGTP酶IMAP家族成员5抗体
BursinMPP6G蛋白调节诱导神经突增生蛋白2抗体
Leupeptin VAV3GTP酶IMAP家族成员7抗体
GRP( Gastrin Releasing Peptide )KIAA1576GTP酶IMAP家族成员8抗体
BSA(标准)viviparous8G蛋白调节诱导神经突增生蛋白1抗体
MBP (Myelin Basic Protein, Rat)peptideVIP Receptor 1G蛋白调节诱导神经突增生蛋白3抗体
VIP (Vasoactive Intestinal peptide)VE Cadherin颗粒溶素抗体
细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)缬沙坦杂质II Valsartan Impurity II95265279850mg，供HPLC法限度检查用
缬霉威140923177缬霉威,标准品，有证书 ,0.1g
缬霉威140923177缬霉威,标准品，有证书 ,10 ng/ul于腈，10ml
缬氨 Valine72184100mg，供鉴别与含量测定用
斜长角闪岩成分分析标准物质70g/瓶
小叶黄杨 HERBA BUXI1.5g/支，TLC法鉴别
小叶黄杨 HERBA BUXI1.5g/支，TLC法鉴别
小诺霉素 Micronomicin66803198200mg，供效价及组分测定用
小牛血去蛋白提取物Deproteinized Calf Blood Extractives2ml/支，供活力测定系统适用性试验用
小米辣 CAPSICI FRUTESCENTIS FRUCTUS1 g/支，薄层色谱鉴别用