MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

库存 ：38

英文名 ：MTT cell proliferation and Cytotoxicity Detection Kit产品规格：500T|1000T

CAS号 ：说见说明书

保质期 ：有效期一年

供应商 ：上海莼试

保存条件 ：-20℃避光保存

规格 ：详见说明书

参数规格:

产品名称	MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
英文名称	MTT cell proliferation and Cytotoxicity Detection Kit产品规格：500T|1000T
货号	CSX9692

中文名称：MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
英文名称：MTT cell proliferation and Cytotoxicity Detection Kit产品规格：500T|1000T
发货周期：1～3天
MTT 分析法以代谢还原噻唑蓝3(4,5dimethylthiazol2yl)2,5diphenyl tetrazolium bromide (MTT)为基础。活细胞的线粒体中存在与NADP 相关的脱氢酶，可将黄色的MTT 还原为不溶性的蓝紫色的甲月赞（Formazan），死细胞此酶消失，MTT 不被还原。用DMSO 溶解Formazan 后可用酶标仪在550nm 波长处检测光密度。
操作方法1.在96 孔板加入细胞100μL/孔（约1×104），置37℃ 5%CO2 细胞培养箱培养24 小时。2.加入适当浓度的受试化合物。3.将96 孔板在37℃，含5% CO2 空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。4.将5×MTT 用Dilution Buffer 稀释成1× MTT。5.每孔加50μL 1× MTT，在37℃孵育4 小时，使MTT 还原为甲臜。6.吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲月赞溶解，用平板摇床摇匀。7.酶标仪在550nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 波长，于490nm 波长处检测亦可）。
结果分析
1. 细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（完全培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD值（完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
2. 求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。
注意事项：
1. MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方，将溶胶和结合两种功能统一，因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况，节省了需购买多种试剂盒的费用，
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
ALFFastDigest® PsuI150 react小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)免疫试剂盒
ATG4DFastDigest® AvrII (XmaJI)20 react小鼠三状腺原氨(T3)免疫试剂盒
ATG9AFastDigest® Hpy8I20 react小鼠乳腺癌标志物CA153免疫试剂盒
Aldolase CFastDigest® AleI (OliI)20 react小鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)免疫试剂盒
Aspartate AminotransferaseFastDigest® Fnu4HI (SatI)20 react小鼠溶菌酶(LZM)免疫试剂盒
ABCG5FastDigest® TauI20 react小鼠绒毛膜促性腺激素β(βCG)免疫试剂盒
ABCG8FastDigest® FspAI20 react小鼠绒毛膜促性腺激素(CG)免疫试剂盒
ACADLFastDigest® DpnI50 react小鼠妊娠相关血浆蛋白A(PAPPA)免疫试剂盒
MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒芹菜素Apigenin52036520mgHPLC≥98%
芹菜素7O槐糖苷Apigenin7OβD20mgHPLC≥98%
秦皮苷;白蜡树苷Fraxin52430120mgHPLC≥98%
秦皮素;七叶甙,七叶苷,七叶树素Esculin53175920mgHPLC≥98%
秦皮素;秦皮亭;白蜡树内酯Fraxetin57484520mgHPLC≥98%
秦皮素;6,7二羟基香豆素6,7Dihydroxycoumarin30501120mgHPLC≥98%
素；素A; 黄花蒿素 AArteannuin A20744692220mgHPLC≥98%
素；黄花蒿素、黄蒿素Arteannuin6396864920mgHPLC≥98%
；春活力Artemisic acid8028658420mgHPLC≥98%
素；素BArteannuin B5090656420mgHPLC≥98%