SHH mRNA原位杂交试剂盒

库存 ：46

英文名 ：详见说明书

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：一年

供应商 ：上海一研

保存条件 ：4°C保存

规格 ：100T/盒

产品具有以下优点：
1、原装进口抗体----高效、灵敏、特异
2、规范包被操作----吸附均匀，吸附性好，空白值低，孔底透明度高
3、先进的优化方案----重复性高，可靠性强
4、购买本公司的SHH mRNA原位杂交试剂盒免费代测
5、技术服务要求：专业，规范，高效
6、适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
7、可检测动物类型丰富：人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
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参数规格：
产品名称  SHH mRNA原位杂交试剂盒
规格:100T/盒
特异性: 人、大鼠、小鼠、鸡
标记方式: 3’—尾段标记
保存条件: 4°C保存一年
试剂盒内容:
1.SHH寡核苷酸探针杂交液    2ml；
2.预杂交液                     2ml；
3.胃蛋白酶（×10;Pepsin）       2ml；
4.封闭液                       5ml；
5.生物素化鼠抗           5ml；
6.SABC-POD                     5ml；
7.生物素化过氧化物酶           5ml。

操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
试剂盒组份：
5×Equilibration Buffer————750μl
FITC-12-dUTP Labeling Mix———100 μl
Recombinant TdT Enzyme—————20 μl
Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl
DNase I (1 U/μl)———————5μl
10×DNase I Buffer——————100 μl
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SHH mRNA原位杂交试剂盒菌株类型:E.coli
培养基:LB培养基
生长条件:37 ℃,  有氧
基因型:Tuner(DE3)感受态细胞基因型
抗性:无抗
质粒转化条件:42 ℃热激
应用:蛋白表达
诱导方法:IPTG
菌株特点:
Tuner系列菌株是LacZY去除的BL21突变菌株，这可以通过细胞培养来调节蛋白表达水平。lac通透酶(lacY)突变使得IPTG能够进入所有的细胞菌内。
不像乳糖或者阿拉伯糖，IPTG是一个可以通过lac通透酶途径进入细胞内的诱导剂。这使得菌株可以使得IPTG的蛋白诱导具有IPTG的浓度依赖性。与 pET系列载体联合使用，可以使得蛋白表达从低表达水平到超高表达水平进行有效调节。蛋白表达水平低的情况下，目的蛋白可能会具有更好的可溶性和生理活 性。
Tuner系列菌株的蛋白表达水平可以通过IPTG浓度进行精确的调节，具有严格的浓度依赖性。
Tuner系列菌株还是lon和ompT蛋白酶缺陷型菌株。
DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。