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文献和实验
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库存 :50
英文名 :Lowry Protein Assay Kit
保质期 :1年
供应商 :上海信裕生物科技有限公司
保存条件 :BSA 蛋白标准品 4℃保存有效期至少 3 个月,-20℃保存有效期至少一年,其他试剂室温保存有效期至少一年。试剂开封使用后请及时密闭保存,Folin 酚乙试剂颜色变成深绿色即失效。
规格 :500T;1000T
Lowry蛋白定量试剂盒
产品说明
Folin-酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将 Folin 试剂还原,产生深蓝色,颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为 5~500μg/ml 蛋白质。Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外,不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。
试剂组分
操作说明(以1000T为例)
1.根据需要量,取适量 Folin 酚甲试剂 A 和 B 按 50:1 混合,混合后有效期为 24 小时,过期失效。
2.根据需要量,取适量 BSA 标准品用 PBS 稀释稀释 10 倍至浓度 0.5mg/ml。若采用酶标仪法(96 孔)
3.将标准品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20ul 加到 96 孔板中,加 PBS 补足到 20ul。
4.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度),加 20ul 到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点误差比较大,所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。
5.将配好的 Folin 酚甲试剂每孔加入 200ul,轻轻震动,混匀,室温放置 10 分钟。
6.各孔加入 20 微升 Folin 酚乙试剂,迅速混匀,37℃放置 30 分钟。用酶标仪测定 A650 计算蛋白浓度。
若采用分光光度计法(接上述步骤 2)
3.取八支(或者更多)5ml 离心管,标号,按下表加入试剂。
4.混匀,37℃放置 30 分钟。分光光度计测定 A650 计算蛋白浓度。
Folin-酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将 Folin 试剂还原,产生深蓝色,颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为 5~500μg/ml 蛋白质。Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外,不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。
试剂组分
组分 | 500T | 1000T |
Folin酚甲试剂 A | 100ml | 100ml×2 |
Folin酚甲试剂 B | 5ml | 5ml |
Folin酚乙试剂(1N) | 10ml | 20ml |
PBS稀释液 | 30ml | 30ml |
BSA蛋白标准品 (5mg/ml ) | 1ml | 1ml |
操作说明(以1000T为例)
1.根据需要量,取适量 Folin 酚甲试剂 A 和 B 按 50:1 混合,混合后有效期为 24 小时,过期失效。
2.根据需要量,取适量 BSA 标准品用 PBS 稀释稀释 10 倍至浓度 0.5mg/ml。若采用酶标仪法(96 孔)
3.将标准品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20ul 加到 96 孔板中,加 PBS 补足到 20ul。
4.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度),加 20ul 到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点误差比较大,所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。
5.将配好的 Folin 酚甲试剂每孔加入 200ul,轻轻震动,混匀,室温放置 10 分钟。
6.各孔加入 20 微升 Folin 酚乙试剂,迅速混匀,37℃放置 30 分钟。用酶标仪测定 A650 计算蛋白浓度。
若采用分光光度计法(接上述步骤 2)
3.取八支(或者更多)5ml 离心管,标号,按下表加入试剂。
4.混匀,37℃放置 30 分钟。分光光度计测定 A650 计算蛋白浓度。
离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7(样品管1) | 8(样品管2) | 9(样品管 3) |
标准蛋白BSA | 0μl | 40μl | 80μl | 120μl | 160μl | 200μl | 200μl适当稀释的样品1 | 200μl适当稀释的样品2 | …… |
稀释液(PBS) | 200μl | 160μl | 120μl | 80μl | 40μl | 0μl | 0μl | 0μl | 0μl |
Folin酚甲试剂 | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml |
混匀,室温放置10分钟 | |||||||||
Folin酚乙试剂 | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl |
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