IPTG Solution (50mg/ml)

库存 ：50

英文名 ：IPTG Solution (50mg/ml)

保质期 ：有效期至少12个月。

供应商 ：上海信裕生物科技有限公司

保存条件 ：冰袋运输，-20℃保存，有效期至少12个月。

规格 ：5mL

IPTG Solution (50mg/ml)
配置方法 

50mg/ml IPTG 5 ml：取250 mg IPTG，溶于5 ml无菌水中，过滤除菌后-20℃贮存。

20mg/ml X-Gal 5 ml：取100 mg X-gal，溶于5 ml 二甲基甲酰胺（DMF），棕色瓶中-20℃ 贮存。此试剂无需灭菌。

操作方法 


1、转化平板的制备： 向铺好的含有相应抗生素的固体琼脂平板表面加入16 µl的IPTG(50 mg/ml)、40 µl的X-gal (20 mg/ml)，使用无菌的弯头玻璃棒将其均匀的涂开，尽量使溶解X-gal的二甲基甲酰胺挥发 干净。

2、转化


（1）取部分连接产物加到50-100 µl感受态细胞中（感受态细胞应刚从-70℃冰箱取出放 于冰浴上，待刚刚解冻时加入连接产物，连接产物的加入量不超过感受态细胞体积的十分之 一），轻弹混匀，冰浴30分钟。
（2）将离心管置于精确42℃水浴90秒，取出管后立即置于冰浴中放置2-3分钟，其间不 要摇动离心管。
（3）向离心管中加入250-500 µl 37℃预热的SOC或LB(不含抗生素)培养基，150rpm，37℃ 振荡培养45分钟。此步目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
（4）将离心管中的菌液混匀，吸取100 μl加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基 上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。待平板表面干燥后，倒置平板，37℃培养12-16 小时。

3、检测

将得到的白色菌落接种 1-5 ml LB 培养基，37℃摇床振荡培养过夜，保存菌种后提取质 粒，应用 PCR 或酶切方法鉴定插入