植物蛋白提取试剂盒

库存 ：30

英文名 ：Plant Protein Extraction Kit

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：有效期1年

供应商 ：上海博湖

保存条件 ：储存条件:-20℃，避光，

规格 ：瓶

免疫球蛋白：
 

 
产品参数：

产品名称	植物蛋白提取试剂盒
英文名称	Plant Protein Extraction Kit
货号	BH-DB015

产品名称：植物蛋白提取试剂盒
别名:植物蛋白抽提试剂盒
英文名称:Plant Protein Extraction Kit
储存条件:-20℃，避光，有效期:至少1年
单位:盒
植物蛋白提取试剂盒用于植物组织中提取总蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂，作用温和，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶的研究。本品仅用于科研。
产品组成:
 规格储存条件:
裂解液   100 ml  2-8℃
蛋白酶抑制剂（100x）1 ml         -20℃
PMSF（100x）1ml
操作方法:
1、植物组织蛋白的提取
去100-200mg的植物组织放入液氮中（最好过夜），在液氮环境中将植物组织碾碎（越碎越好）；
加入1ml的裂解液，4℃裂解20min，期间每隔5min震荡1次；
4℃，14000转离心30min；
吸取上清至新的管中；
进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
（提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)
注意事项： 
 1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
 2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
 3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
 4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
 5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤 ：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示：
    工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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