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文献和实验
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库存 :20
CAS号 :详见说明书
保质期 :有效期1年
供应商 :上海博湖
保存条件 :储存条件:-20℃,避光,有效期:至少1年
规格 :瓶
产品名称:细菌蛋白提取试剂盒储存条件:-20℃,避光,有效期:至少1年
细菌蛋白提取试剂盒用于大肠杆菌提取可溶性蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂,作用较为强烈,可快速获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶的研究。细菌蛋白提取试剂盒仅用于科研。
操作方法:
1、细菌可溶性蛋白的提取
产品名称 | 细菌蛋白提取试剂盒 |
英文名称 | |
货号 | BH-DB005 |
将菌体湿重称重,然后按照比例(1g:10ml)加入的新配置的裂解液,混匀,过程注意冰上操作;
将混匀液移入超声仪中,超声;
超声条件:总时间45min,超声时间3s,间隔时间3s,过程为冰浴环境;
超声结束,w4度离心,10000r/min20min;
吸取上清至新的管中;
进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80 oC,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
操作步骤:
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
107个 | 0.5 mL~1 mL |
5×106个 | 0.2 mL~0.5 mL |
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
以下是细菌蛋白提取试剂盒的相关产品:
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HumanmembraneIgM,mIgM 人表面膜球蛋白M(mIgM)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 仙鹤草酚B TLC鉴别用 10mg
HumanMetallothionein,MT 人金属硫蛋白(MT)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 仙鹤草酚D HPLC≥98% 20mg
HumanMethemoglobin,MHB 人高铁血红蛋白(MHB)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 仙茅苷 HPLC≥98% 20mg
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Humanneuophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL 人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 莶精醇 HPLC≥98% 20mg
Humanneuraminidase,NA 人神经氨酸酶(NA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 腺苷 HPLC≥99% 20mg
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HumanNeuronalChemorepelleSlit2 人神经生长导向因子Slit2ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 相思子碱 HPLC≥95% 20mg
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小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA检测试剂盒MouseBonemorphogeneticprotein6,BMP-6ELISAKit 96T/48T 印乌碱 HPLC≥98% 20mg
人基质金属蛋白酶25(MMP25)试剂盒 Human maix metallopeptidase 25,MMP25 ELISA kit 橘红素 HPLC≥98% 20mg
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固定液的应用:
1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以pH7 2~7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1.单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多:主要用于培养细胞的固定。
2.混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效
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