RT-抗亚碲酸盐大肠杆菌（大肠埃希氏菌）157:7型探针法荧光定量PCR试剂盒说明书

库存 ：29

英文名 ：Tellurite-resistant Escherichia coli O157:H7

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海西格

保存条件 ：详见说明书

规格 ：50T

产品名称	RT-抗亚碲酸盐大肠杆菌（大肠埃希氏菌）157:7型探针法荧光定量PCR试剂盒说明书
英文名称	Tellurite-resistant Escherichia coli O157:H7
货号	XGR7266

PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途，下面就向大家介绍PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	5   min	1
变性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
终延伸	72℃	5   min	1

RT-抗亚碲酸盐大肠杆菌（大肠埃希氏菌）157:7型探针法荧光定量PCR试剂盒说明书PCR实验步骤
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
操作步骤 :
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
       引物1（10pM）               2μl
       引物2（10PM）              2μl
       Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
以下是RT-抗亚碲酸盐大肠杆菌（大肠埃希氏菌）157:7型探针法荧光定量PCR试剂盒说明书的相关产品：
硬脂酸锂Lithium stearate
其他中文名称： 十八酸锂
英文名称： Lithium stearate
其他英文名称： Stearic acid lithium salt
产品： LR
包装：100克/500克
CAS号：4485125
C18H35LiO2=290.42
级别：LR
含量(以Li2O计)：5.0～5.6%
干燥失重：≤1.0%
化物：≤0.2%
性状：粉末。微溶于水,不溶于和。相对密度1.025。熔点220℃。
用途：生化研究。粉末冶金润滑剂。高温润滑剂。工业腐蚀抑制剂
保存：RT
L叔亮酸shēng huà shì jì容量：RT5克
Tobramycin 100mg原装 INALCO5855
偏硼酸1克RT
4氧基本基硼醋 4Mqthoxyphqnylboronic ccid 270070
200ul吸头25u保存：20℃
氧化铜粉shēng huà shì jì容量：1公斤
88儿茶速DLCATECHIN
1,5nepxtxelenedisulfonic acid 81
芘 Pyrene, ≥99.0% 9000 1G 多肽试剂
正酸乙酯25克2～8℃
小鼠趋化因子C-C-基元受体1(CCR1)ELISA试剂盒 ，英文名： CCR1 ELISA Kit
猪α干扰素(IFN-α)ELISA检测试剂盒PorcineIerferonα,IFN-αELISAKit 96T/48T
大鼠坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)免疫试剂盒 Rat Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-Ⅰ ELISA KIT
英文名称Humanα1-AcidglycoproteinELISAKit人α1-酸性糖蛋白(α1-AGP)规格：96T/48T
动物组织β-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒20次
SheepComplemefragme3brccptor,C3bRELISA试剂盒绵羊补体片段3b受体(C3bR)ELISA试剂盒规格：96T/48T
RT-抗亚碲酸盐大肠杆菌（大肠埃希氏菌）157:7型探针法荧光定量PCR试剂盒说明书兔子肿瘤坏死因子α(TNF-α) ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Rat vascular endothelial cell adhesion molecule 1 (VCAM-1/CD106) ELISA Kit 大鼠血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒
Humanisletcellaibody,ICAELISAKit 人胰岛细胞抗体(ICA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Humancytokeratin19,CK-19ELISA试剂盒人细胞角蛋白19(CK-19)ELISA试剂盒规格：96T/48T
组织HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒定性检测试剂盒20次
HumanplateletmembraneglycoproteinⅣ,GP-ⅣELISAKit人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。