文献支持血液高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量酶法测定试剂盒 E1017 厂家直销，提供OEM定制服务，大包装更优惠

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供应商 ：北京普利莱基因技术有限公司

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规格 ：250次

血液高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）酶法测定试剂盒     E1017
描述：血浆中的脂质以脂蛋白-胆固醇-甘油三酯复合物形式存在。高密度脂蛋白HDL主要在肝脏和小肠生成，其主要功能是将肝外组织的胆固醇通过血液运回肝脏，转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出体外，具有抗动脉粥样硬化作用。临床常规血脂检验包括四项：总胆固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)和高密度脂蛋白-胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)、甘油三酯(triglyceride，TG)。血浆总胆固醇包括2/3的胆固醇酯和1/3的游离胆固醇。HDL-C 的测定需要预先分离不同密度的脂蛋白复合物，再测定其中的胆固醇含量。
原理：试剂盒采用世界卫生组织(WHO)、美国FDA、中国《全国临床检验操作规程》推荐的HDL分离方法和胆固醇测定方法，操作简便可靠，灵敏度高，检测范围20~5000 µmol/L，重复性佳。采用CHOD-PAP终点法结合经典GPO Trinder酶学反应¹：(1) 胆固醇酯酶分解胆固醇酯为游离胆固醇。(2) 胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化。(3) 反应过程产生过氧化氢。
组成：（250次）
(1) HDL捕获剂  13ml
(2) R1  40ml
(3) R2  10ml
(4) 5 mmol/L胆固醇标准品   0.5ml
4ºC保存，6个月有效
样品准备：人和动物的自然凝固后血清、EDTA抗凝血浆。不建议使用肝素抗凝。新鲜血液4ºC 2000 g离心5 min得到血浆，非抗凝血4ºC放置2小时得到血清。可4ºC存放数天或−20 ºC半年。如超过线性范围用生理盐水1:1~1:5稀释后测定。
所需设备：酶标仪、生化分析仪、可见光分光光度计。最佳工作波长550-555nm，如无此波长建议优先选用570、530、490nm。比色杯光径1cm。
标准品稀释：5 mM胆固醇标准品用无水乙醇倍比稀释为2500、1250、625、312.5、156、78、36 µmol/L。通常设置稀释4个点/管即可，注意设置0浓度对照反应管。立即使用，用毕弃去。
1. HDL-胆固醇分离步骤
1.1. 取50 μL血清或血浆(样品体积范围20-100 μL)
1.2. 加等体积50 μL的HDL捕获剂，振荡混匀。
1.3. 室温孵育10分钟。沉淀10-30分钟、室温或4ºC不影响结果，但条件要一致。
1.4. 2000 g离心20分钟。离心温度4～22度均可，不同样品离心条件要一致。
1.5. 上清液体含HDL-胆固醇。
2. HDL胆固醇测定步骤：
2.1. 配制测定工作液: 按4:1比例，取4 ml试剂R1与1 ml试剂R2混合，立即使用。4ºC保存<1天，变色弃去。
2.2. 取190 µl测定工作溶液，加入微板孔内。
2.3. 加入步骤1.5制备的上清液10μL。上清液体含HDL-胆固醇，放置后如有絮状物应再次离心。标准品管的加样量也是10 µl标准品。反应总体积200 µl。
2.4. 37ºC 20min (15~30min)。或25ºC室温反应30 min但灵敏度略低。反应平衡后颜色在60 min内稳定。
2.5. 先用蒸馏水空白管调零。然后测定各管OD550值。绘制标准曲线并计算总胆固醇浓度。Excel作图步骤参考：各标准管OD值为y轴，标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点，点击-添加趋势线-，点击-选项-，点击-显示公式-和-R²值。
说明：

1. 可微量调整样品与工作液体积比例。
2. 正常人血中总胆固醇参考值2.86~5.98mmol/L或 110~230mg/dl。
3. 维生素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、强还原剂二硫苏糖醇、巯基乙醇等干扰测试。

参考文献

1. Trinder, P. (1969). Annals of Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145