DEAE-Dextran细胞转染试剂盒价格

库存 ：29

英文名 ：DEAE-Dextran Transfection Kit

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海研生

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：>200次

实验报告：
一、DEAE-Dextran细胞转染试剂盒价格分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：DEAE-Dextran细胞转染试剂盒价格
英文名称：DEAE-Dextran Transfection Kit
产品规格：>200次
发货周期：1～3天
本试剂盒是一种适合于把DNA转染到培养的真核细胞中的转染试剂盒。对于六孔板而言，一个包装的本转染试剂如使用常规方法可以转染2500个孔，如使用预处理方法可以转染200个孔。
试剂盒组分
DEAE-Dextran溶液————20ml
10×PBS—————————20ml
氯喹溶液————————3.5ml
关于DEAE-dextran的细胞转染方法早在1968年就有相关论文发表。DEAE-dextran可以促使DNA结合到细胞膜上，然后通过内吞作用(endocytosis)进入细胞。基于DEAE-dextran的细胞转染方法适用于瞬时转染(transienttranfection)，但不适用于筛选稳定表达细胞株。DEAE-dextran在较高浓度作用较长时间会对细胞产生一定毒性。
目前基于DEAE-dextran的细胞转染方法有两种，一种方法为把DNA和DEAE-dextran混合后加入到细胞中，另一种方法为先用DEAE-dextran预处理细胞，然后再加入DNA。后一种方法是在前一种方法的基础上经过改进而产生的，对于一些细胞包括Hela、COS、NIH3T3和KB细胞等，后一种方法可以增加细胞对DNA的摄入量，显著改善转染效果。氯喹的加入可以抑制溶酶体对外源DNA的降解，从而提高转染效率。但对于具体的细胞、具体的培养条件，如需获得更加理想的转染效率，必须自行摸索上述各种转染方法，找出优化的转染方法。
基于DEAE-dextran的细胞转染方法不仅可以转染贴壁细胞，也可以转染悬浮细胞。转染效率可以通过转染表达EGFP或其它荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。
注意事项
1.使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒，可以使用的质粒大量抽提试剂盒(YT003)进行抽提，以保证获得较高的转染效率。
2.转染前细胞必须处于良好的生长状态。
3.试剂盒中各试剂均经过无菌处理，可以直接使用。在细胞转染过程中要严格注意无菌操作。
4.需自备用于洗涤的PBS或HBSS，以及用于稀释10XPBS的无菌水。
5.稀释或配制DEAE-Dextran溶液或DNA的1XPBS可以用试剂盒中提供的10XPBS稀释。
6.氯喹溶液对人体有害，请注意适当防护。
储存条件4℃，有效期1年。
注意事项：
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
利血;利血敏18050  规格：;20mg
利尿（E1800000  规格：;20mg
利奈孕（L0800000  规格：;20mg
利福平18 00-500  规格：;20mg
利多卡（L0595000  规格：;20mg
丽春花定182705  规格：;20mg
雷公藤红素   规格：;20mg
雷公藤红   规格：;20mg
劳拉泮：用于系统适用性试验（Y0000576  规格：;20mg
劳拉泮（L0750500  规格：;20mg
劳拉泮 质D（Y0000718  规格：;20mg
莨菪 质E（Y0000449  规格：;20mg
蓝藻叶黄素   规格：;20mg
兰雪醌,白花丹精,矶松素，白花丹醌16920  规格：;20mg
兰索拉唑：用于峰鉴别试验（Y0000774  规格：;20mg
DEAE-Dextran细胞转染试剂盒价格 细胞分裂相关蛋白CSTF64抗体 LAMC2 ELISA Kit 层粘连蛋白亚γ-2(LAMC2)ELISA试剂盒
α-香 订购|咨询 规格 HPLC≥98%；20mg/支
 化细胞分裂相关蛋白CSTF64抗体 LN-β1 ELISA Kit 层粘连蛋白β1(LN-β1)ELISA试剂盒
大黄 对照品 订购|咨询 规格 20mg;98.5%
 CD3抗体 LN ELISA Kit 层粘连蛋白(LN)ELISA试剂盒
沃妙林峰鉴别 对照品 订购|咨询 规格 20mg
 化细胞分裂相关蛋白CSTF64抗体 LN-5 ELISA Kit 层粘连蛋白-5(LN-5)ELISA试剂盒
维生素E 对照品 订购|咨询 规格 100mg;99.2％
 CD4抗体 LN ELISA Kit 层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒
型肝炎病抗体快速检测试剂国家参考品 订购|咨询 规格 45支/套
 白细胞共同抗原抗体抗体 Brucella Ab IgG ELISA Kit 布鲁氏菌抗体IgG(Brucella Ab IgG)ELISA试剂盒
q;fraxinellone 订购|咨询 规格 20mg
 白细胞共同抗原抗体抗体 BLM ELISA Kit 布卢姆综合征蛋白(BLM)ELISA试剂盒
酰化白藜芦醇;Acetyl-trans 订购|咨询 规格 20mg
 白细胞共同抗原抗体抗体 OPAs ELISA Kit 不透光相关蛋白(OPAs)ELISA试剂盒
酰黄芪皂苷I;Acetytastrag 订购|咨询 规格 10mg
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。