染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒)说明书

库存 ：23

英文名 ：Chromatin Immunoprecipitation(ChIP)Assay Kit

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海研生

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：22次

操作步骤(仅供参考)：
1、染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒)说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒)说明书
英文名称：Chromatin Immunoprecipitation(ChIP)Assay Kit
产品规格：22次
发货周期：1～3天
本试剂盒用于通过免疫沉淀来沉淀和目标蛋白结合的染色质片段，最后通过PCR或Southern等方法来检测沉淀的染色质片段的试剂盒。通常用于检测特定的转录因子或组蛋白等基因组DNA结合蛋白是否和预期的特定基因组DNA序列在同一复合物中。
通过ChIP检测可以获得在体的(InVivo)目标蛋白和预期基因组DNA片段是否在同一复合物中的结论。EMSA，也称gelshift获得的结果是体外的(InVitro)目标蛋白和预期基因组DNA片段的结合结果，可以推断细胞内也发生类似的结合，但并不代表该情况在细胞内也真实发生。而ChIP的检测结果则可明确说明这种结合在细胞内是真实发生的。
本ChIPAssayKit采用了ProteinA+GAgarose，比ProteinAAgarose或ProteinGAgarose适合于免疫沉淀更多种类的抗体，包括mouseIgG1，IgG2a,IgG2b,IgG3,IgA,ratIgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,rabbitIgG,rabbitandgoatpolyclonalAbs，以及humanIgG1,IgG2,IgG3和IgG4。
本试剂盒中经过SalmonSpermDNA预饱和的ProteinA+GAgarose和目的基因组DNA的非特异性结合大大下降。
提供了预混合的对照引物(ControlPrimers)。可用于扩增humanGAPDH的部分相应序列，引物序列为
5'-TACTAGCGGTTTTACGGGCG-3'；
5'-TCGAACAGGAGGAGCAGAGAGCGA-3'
本ChIPAssayKit如果用于常规的染色质免疫沉淀，共可以免疫沉淀22个样品。
产品组份
ProteinA+GAgarose/SalmonSpermDNA————3ml
GlycineSolution(10X)————————————30ml
ChIPDilutionBuffer————————————48ml
LowSaltImmuneComplexWashBuffer————24ml
HighSaltImmuneComplexWashBuffer————24ml
LiClImmuneComplexWashBuffer——————24ml
TEBuffer—————————————————48ml
0.5MEDTA—————————————————250μl
5MNaCl——————————————————500μl
1MTris,pH6.5——————————————500μl
SDSLysisBuffer—————————————10ml
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
辛酰N葡糖　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
Mega8　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
壬酰N葡糖　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
Mega9　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
醌（400K3）　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
Menadione　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
缩节（助壮素）　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
Mepiquat Chloride　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
聚酰凝胶DNA回收试剂盒　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
PolyGel DNA Extraction Kit　含量：　规格：20mg/支
质粒大量提取试剂盒（非柱式法）　含量：≥ 98%　规格：10mg/支
QS Plasmid Maxi Kit　含量：≥ 98%　规格：10mg/支
血DNA提取试剂盒(溶型）　含量：≥98%　规格：10mg/支
RelaxISO Blood DNA Kit I　含量：≥ 97%　规格：5mg/支
血DNA提取试剂盒(溶型）　含量：≥ 98%　规格：20 mg/支
RelaxISO Blood DNA Kit II　含量：≥ 98%　规格：20 mg/支
染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒)说明书Celecoxib48T/96T进口、国产1620CeftiofurSodiumHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620CefoxitinHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620CefpiramideHPLC≥98%
Cephalexin48T/96T进口、国产1620Ceftazidime,Delta-3-IsomerHPLC≥98%
CephalothinSodium48T/96T进口、国产1620CeftazidimePentahydrateHPLC≥98%
CephapirinBenzathine48T/96T进口、国产1620CeftizoximeHPLC≥98%
CephapirinSodium48T/96T进口、国产1620CeftriaxoneSodiumHPLC≥98%