GFP标记的小鼠子宫颈癌细胞培养

品系 ：详见说明书

ATCC Number ：详见说明书

细胞类型 ：详见说明书

肿瘤类型 ：详见说明书

CAS号 ：详见说明书

供应商 ：上海一研

库存 ：25

英文名 ：GFP标记的小鼠子宫颈癌细胞

生长状态 ：贴壁生长

年限 ：详见说明书

运输方式 ：电询

器官来源 ：详见说明书

是否是肿瘤细胞 ：否

细胞形态 ：上皮细胞样

免疫类型 ：详见说明书

物种来源 ：详见说明书

相关疾病 ：详见说明书

规格 ：详见说明书

培养步骤：
GFP标记的小鼠子宫颈癌细胞培养对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
以下是产品信息的认购信息：
产品名称： GFP标记的小鼠子宫颈癌细胞培养
商品货号： EY-Z6901
中文名称： GFP标记的小鼠子宫颈癌细胞
形态特征：上皮细胞样
生长特性：贴壁生长
特征特性：该细胞携带绿色荥光蛋白基因，可表达绿色荥光蛋白，可作为报告基因用于外源基因表达研究。
培养条件：DMEM +10%FBS
传代方法：1:3传代,2-3天传一代
细胞冻存步骤：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
复苏细胞步骤：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代步骤：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冻存条件：基础培养基+8%DMSO+20%FBS

 
操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
甜菜碱，100g　n-Octanoic acid　规格：分析标准品,≥99.9%(GC)
甜菜碱，500g　 n-Octanamide　规格：>98.0%(GC)(N)
秋水仙碱，1g　 Nobiletin　规格：HPLC≥98%,BR
秋水仙碱，5g　 Nobiletin　规格：HPLC≥98%，标准品
吲哚美辛，100g　 n-Nonyl-beta-D-maltopyranoside　规格：>98%,BC
吲哚美辛，25g　 N-Nonanoyl-N-methylglucamine　规格：>98%,BR
吲哚美辛，500g　 N-Nitrosodiethylamine　规格：分析标准品
吲哚美辛，5g　 N'-Nitro-L-arginine-methyl ester hydrochloride　规格：>98%
腺苷，100g　 N'-Nitro-D-arginine 　规格：0.98
脱纤维牛血，500ml　 DL-Homophenylalanine　规格：>98%,BR
脱纤维马血，100ml　 DL-Homocysteine 　规格：0.95
脱纤维马血，500ml　 DL-Histidine·HCl　规格：>98%,一水物，BR
TBS-葡萄糖溶液，500ml　 DL-Histidine　规格：0.98"
LB Lennox培养基粉剂，1L　DL-Glutamine　规格：>98%,BR
LB Lennox培养基，500ml　 DL-Glutamic acid monohydrate　规格：>98%,水合物
LB培养基粉剂，1L　 D-Leucine methyl ester hydrochloride　规格：>98%(T)
LB培养基，500ml　 D-Leucine　规格：>98%,BR
LB冷冻缓冲液，100ml　 DL-erythro-Dihydrosphingosine　
GFP标记的小鼠子宫颈癌细胞培养Goat Anti-Mouse IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的羊抗小鼠IgG规格 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的羊抗小鼠IgG规格 0.1ml
Goat anti-Mouse IgG whole serum  羊抗小鼠IgG抗血清规格 1ml
Goat Anti-Mouse IgG  羊抗小鼠IgG规格 1mg
Goat Anti-human IgM/RBITC  罗