动态显色法鲎试剂盒说明书

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CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海抚生

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：42T/盒2.2ml

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
产品名称  动态显色法鲎试剂盒说明书
规格： 42T/盒2.2ml
储存条件   2-8°C
单位 盒
动态显色法鲎试剂兼有动态浊度法鲎试剂和终点法显色基质鲎试剂的优点。不需要凝固蛋白原形成凝胶，根据显色反应来准确定量细菌内毒素，抗干扰能力强。特别适用于生物样本的检测，如疫苗、抗体、蛋白质、核酸、临床样本等的内毒素分析。



1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。

      动态显色法鲎试剂盒说明书尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
含225ml蒸馏水均质袋 英文名称： 产品规格：10个/包 
1瓶 C6细胞株 C6 低温运输和保存
2 ug pOPRSVI/MCS pOPRSVI/MCS 低温运输，-20℃保存
葡萄糖培养基 用于鉴别细菌利用盐作为唯一氮源并分解葡萄糖的试验(GB/T4789.28－2003 中3.8，GB/T4789.5－20... 100g
刘荣标氏鞭毛染色液 英文名称： 产品规格：5ml*8 
5g L-谷胱甘肽（还原型） Glutathione 4℃保存
500mL Phospho-Protein Extraction Buffer II  Phospho-Protein Extraction Buffer II  常温保存
营养琼脂 用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定（GB/T4789.28－2003 中4.7 ，GB/T4... 250g
10mg 莽草酸 Shikimic Acid 室温干燥保存
2 ug pLentiCRISPR cas9 v.1 pLentiCRISPR cas9 v.1 低温运输，-20℃保存
蓝-DNA琼脂 用于金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶的试验。(SN 0172-92)。 100g
含青霉素酶TSA平板 英文名称： 产品规格：9cm*10/包 
250g 干粉型LB-Lennox培养基 LB-Lennox Medium Powder 常温
100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.5  HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.5  常温保存
葡萄糖肉汤 Dextrose Broth 250g
5g 化可的松 Hydrocortisone  
2 ug pACT-MyoD pACT-MyoD 低温运输，-20℃保存
动态显色法鲎试剂盒说明书当药醇苷(标准品) Swertianolin 23445-3 质量规格：HPLC≥98%,标准品
坎地沙坦酯氧基类似物 Candesartan Cilexetil Methoxy Analogue 1026042-12-5 质量规格：国进口
DTNB 5,5'-二硫双(2-硝基酸) 1g  瓶
阿拉伯胶 Arabic gum 2593228 质量规格：>99%,医药级
瑞格非尼 Regorafenib(BAY 73-4506) 5037-03-7 质量规格：>99%,多激酶抑制剂
Mycophenolate Mofetil 吗替麦考酚酯 1157-34-6  1mg
安非他酮 Amfebutamone Hydrochloride 31677-93-7  质量规格：>98.0%，进口
毒晰外泌肽4 Exendin 4 1418-74-9 质量规格：>95%,BR
洛沙坦 Losartan 114798-26-4 质量规格：国进口
Eugenol 丁香酚 97-53-0  0.5ml
黄柏酮（标准品） Obacunone  1-03-1 质量规格：HPLC≥98%，标准品
抗蛋白酶(进口) Antipain dihydrochloride 37682-72-7 质量规格：进口
(R)-西汀-d5  (R)-Fluoxetine-d5 Hydrochloride 114247-09-5 (unlabeled) 质量规格：国进口
硅胶板G 10×10CM 20片/盒  盒
曲克芦丁（标准品） Troxerutin 7085-55-4 质量规格：HPLC法含量测定
Levonorgestrel 左炔诺孕酮 1g  瓶

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.