L-15培养基说明书

库存 ：21

英文名 ：Leibovitz'sL-15CellCultureMedium

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海抚生

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：500ml

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
产品名称  L-15培养基说明书
规格： 500ml
别名 L-15培养基
英文名称 Leibovitz'sL-15CellCultureMedium
储存条件    2-8℃，避光，有效期1年
单位瓶
Leibovitz'sL-15CellCultureMedium
IscoveL-15(Leibovitz)培养基最初开发用于非二氧化碳依赖型细胞生长环境（该环境需要碳酸氢钠）。
L-15缓冲体系由盐类、碱性氨基酸、和替代glucose的替代物galactose维持。L-15支持HEp-2、LLC-MK2以及原代胚胎和成人组织的体外培养。


1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。

      L-15培养基说明书尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
2 ug pCYB 3 pCYB 3 低温运输，-20℃保存
250ml Glycerol Solution（甘油溶液），20% Glycerol Solution，20% 常温保存
KEA肉汤 英文名称：KEA Broth 产品规格：250g 
20只/袋 口腔拭子（医用简装）   
100U Deep Vent DNA 聚合酶 Deep Vent(exo-) DNA Polymerase -20℃保存
50T 乙型肝炎病毒cccDNA PCR测定试剂盒  低温运输，-20℃保存
四环素检定琼脂 英文名称：Tetracyline Examination Agar 产品规格：250g 
2 ug pBMN-IRES-GFP pBMN-IRES-GFP 低温运输，-20℃保存
2 ug pBlueScriptR PPP2R1B pBlueScriptR PPP2R1B 低温运输，-20℃保存
伊红美蓝琼脂平板（9cm） Eosin-Methylene Blue Agar 10个/包
100g RNA级SDS (十二基硫酸钠)   常温
200 mL 人胰岛细胞分离液1.056 Cell Separation Solution -20℃保存
50T 立克次体PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存
麦迪、麦白霉素检定培养基（普通轻质斜面培养基） Wheat albomycin Test Medium 250g
100mL DNA级Tris HCl，1M，pH9.0  
2 ug pTRE2 pTRE2 低温运输，-20℃保存
50T 玉米MON810 PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存
L-15培养基说明书顺式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(标准品) DHA 67-54-5 质量规格：分析标准品
L-脯氨酸酯盐 L-Proline methyl ester hydrochloride 33-40-6 质量规格：>98.5%,BR
3,3'-二硝基二酮(>99.0%(GC)) 3,3'-Dinitrobenzophenone 222-05-9 质量规格：>99.0%(GC)
马西尼/马泽尼 Flumazenil 785-81-4 质量规格：>99%,USP31
醋酸可的松 Cortisone -acetate 157 质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养
羟乙基 HES 107-36-8 质量规格：>80%,粘状液体
Tanshinone IIA-sulfonic sodium 丹参酮IIA-钠 69659-80-9  20mg
Liriope muscari baily saponinsC 短葶山麦冬皂苷 C 87480-46-4  20mg
PVDF膜(0.22um) 13.25cm×15cm 13.25×15  张
去-4-代苄基莫沙必利 Des-4-fluorobenzyl Mosapride 152013-26-8 质量规格：美国进口
川芎嗪(标准品) Tetramethylpyrazine 1124-11-4 质量规格：HPLC≥98%,标准品
Neoagarohexaose 新琼六糖 25023-93-2  10mg
N-去丁基布比卡因 N-Desbutyl Bupivacaine 1-20-2 质量规格：美国进口
罗硝唑 Ronidazole 7681-76-7 质量规格：>98.5%,BR
大蒜素，二烯丙基二硫 Allicin 539-86-6 质量规格：>98%,油状
支原体检测试剂盒 1T  盒

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.