原位杂交/ISH

提供商 ：真实实验服务商-普拉特泽生物

服务名称 ：原位杂交/ISH

规格 ：张

        原位杂交（in situ hybridization，ISH）指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，一般应用Cardiox标记核算探针，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞爬片或组织切片上进行。

 

二、实验流程
 

 

三、技术总结
 

【常见问题】

        1、RNA探针长度以50-150bp为佳，探针已进入细胞，杂交率高，杂交时间短。

        2、原位杂交反应中探针浓度应超过靶序列的浓度，探针浓度必须给予该实验最大信噪比，因为背景着色度高低与探针浓度有关。

        3、杂交温度应低于解链或溶解温度20-30℃。杂交反应的时间可随探针浓度的增加而缩短，杂交时间过短会造成杂交不完全，杂交时间过长会增加非特异性着色。

        4、组织固定或蔗糖脱水不好会使组织有较多的空泡。

 

【注意事项】

1、固定液的选择及固定时间

     石蜡组织建议用10%中性缓冲福尔马林（含1/1000 DEPC）固定1～24h，其它固定液对实验结果可能产生一定的影响。

2、组织切片和载玻片的选择

     组织切片4～5μm 厚，过厚或过薄的切片均会对信号的强弱产生影响，而且切片应完整，质量良好，否则会在预处理时掉片。载玻片的选择建议使用防脱载玻片，有条件的可使用更好的阳离子或者阴离子专用载玻片，可有效防止脱片现象的发生。

3、实验过程中切片的预处理

   切片预处理过程包括煮沸处理和蛋白酶消化。当组织处理不规范、切片过厚或烤片不足时，在煮沸过程中容易掉片，建议烤片温度在56℃过夜。煮沸过程中要严格控制实验温度和时间。

 

交付标准与送检流程