各种细胞模型

各种细胞模型

价格: ¥1000 - 10000

产品详情

相关推荐

提供商 :MDL-北京百奥思科

服务名称 :各种细胞模型

规格 :具体联系客服

细胞模型,就是可以在某种层面模拟疾病的特征的细胞,用于相关的疾病机制研究和治疗研究。下面举例某一个细胞模型的操作方法。

油酸钠+棕榈酸钠组合诱导HepG2脂肪肝细胞模型  

1.1 细胞来源
人肝癌细胞株 HepG2 细胞
1.2 主要试剂和药物
高糖 DMEM 培养基、胎牛血清,油酸,四甲基偶氮唑蓝(MTT),油红 O,苏木素,甘油三酯、胆固醇、谷丙转氨酶(alanine aminitransperase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)测定试剂盒,DEPC ,Trizol ,反转录试剂盒,SYBR Green PCR混合液,PCR 引物。
1.3 细胞培养
HepG2 细胞,用含 10%胎牛血清高糖 DMEM 培养液培养。将 HepG2 细胞分为对照组和实验组。对照组用普通培养基培养,实验组用含不同浓度的油酸培养基培养。
1.4 油酸浓度的确定
HepG2 细胞予不同浓度油酸培养 24h,通过 MTT 检测与正常细胞活性无明显差异的油酸浓度范围。选择对细胞活性影响小,且结合细胞形态观察,不会导致细胞裂解死亡的浓度作为诱导细胞形成脂肪变性的最适浓度。
1.5 细胞内脂滴蓄积情况的观察
将高压灭菌盖玻片放置于 60mm 培养板,HepG2 细胞悬液滴在盖玻片上,5h 后待细胞贴壁,继续加入普通培养基培养,待细胞融合至 50%~70%时,换用含不同浓度的油酸培养 24h,处理结束后,弃去培养液,PBS 漂洗,甲醛固定细胞,油红 O 染色液染色 10min,弃去染液,加 70%乙醇分色数秒,蒸馏水冲洗3 遍,每次 1min,苏木素染色数十秒,蒸馏水再冲洗 3 遍返蓝后,指甲油封片,显微镜下收集图像。结果判定标准:以细胞质内出现红色的脂滴为脂肪变性细胞。结果按以下标准记录:随机选择 6 个高倍视野,每个视野计数 100 个细胞,然后计算其平均脂变率。
1.6 细胞内甘油三酯的测定及细胞培养液中 ALT/AST 测定
HepG2 细胞分别予普通培养液及含不同浓度的油酸培养液培养 24h,处理结束,收集细胞培养液,按试剂盒说明书检测细胞培养液当中 ALT、AST 的含量。另外 PBS 轻柔冲洗细胞,收集细胞于 EP 管中,反复冻融和超声破碎裂解细胞,1500rpm 离心5min,吸取上清按甘油三酯试剂盒测定细胞裂解液 TG 含量。
1.7 实时定量 PCR 检测脂肪肝相关基因表达
将细胞培养于 60mm 培养皿中,待油酸干预结束,PBS 冲洗后提取细胞总 RNA,用反转录试剂盒反转录为 cDNA,再实时定量 PCR 检测相关基因 mRNA 表达。各基因引物序列:FAS 上游引物 :5' -TGGCTGCCTACTACATCGACT -3', 下 游 引 物 :5' -GTGCTCCATGTCCGTGAACT-3';CPT-1:上游引物:5'-TCCAGTTGGCTTATCGTGGTG -3', 下 游 引 物 :5' -CGTTTCCAGAGTCC
GATTGATTT-3';IL-6 上游引物:5'-ACAGCCACTCACCTCTTC-3',下游引物:5'-AAGTCTCCTCATTGAATCCAG-3';UCP-2 上游引 物 :5' GCTGGTGGTGGTCGGAGATA -3', 下 游 引 物 :5' -ACAGTTGACAATGGCATTACG-3';内参 GAPDH 上游引物:5'-TTGCTGTTGAAGTCGCAGGAG -3', 下 游 引 物 :5' -TGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3'。
1.8 统计学处理
各实验组和对照组的比较采用 GraphPad Prism 5 统计软件包分析,所有数据均以表示,两组间比较采用 t 检验,实验结果用数据及图表表示。


-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
MDL让科研更简单!
MDL为您提供科研CRO一站式服务,方案评估、方案设计、方案执行、报告整理以及后续SCI写作与发表等,全程实验技术服务。MDL自有实验室超过6000平米。聚焦基础科研、动物模型、细胞模型、组学服务、生物信息学、基因检测、细胞增殖、细胞周期凋亡、细胞培养、病毒包装,稳定株筛选、原代细胞分离、流式检测、平板克隆、划痕、侵袭迁移、WB、蛋白抽提、蛋白定量、蛋白质纯化、蛋白双向电泳、明胶酶谱、定量pcr、荧光定量PCR服务、包埋切片爬片、免疫组化、免疫荧光等医学科学基础研究与转化医学的研究。08年至今我们与科研人员共同完成12000+课题。在课题设计、课题执行、试剂采购、动物造模、标本检测、报告整理以SCI科研文章指导投稿等方面积累了丰富的经验。用户可以参与实验,实验过程中有任何疑问,我们均提供免费技术支持,欢迎来我公司参观考查。


 
  
 

服务热线:010-80842119
实验室地址:肽谷生物医药产业园A7号楼 
公司网址:http://www.mdlbiotech.com/
服务邮箱:market@mdlbiotech.com

北京百奥思科生物医学技术有限公司

品牌商

实名认证

钻石会员

入驻年限:6年

联系人:郭经理

地址:北京

电话联系

购买咨询

换一个