抑郁症动物模型的构建

抑郁症动物模型的构建

价格: ¥300 - 1500

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提供商 :MDL-北京百奥思科

服务名称 :抑郁症动物模型的构建

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选用社交失败动物模型和慢性温和不可预知性应激动物模型来模拟人类的抑郁状态,通过糖水偏爱实验、社交实验、旷场实验、强迫游泳实验、体重变化及抗抑郁药治疗等实验指标来评价动物模型是否建造成功。
【建模材料】
1、实验试剂
蔗糖、Paroxetine 、Imipramine
2、实验仪器
小鼠社交失败旷场(42 cm * 42 cm * 42 cm)、大鼠旷场(1 m * 1 m * 40 cm)、强迫游泳实验仪、行为学视频分析系统
3、实验动物和分组
C57BL/6J 雄性小鼠(6-7 周)137 只,其中 67 只用于社交失败模型,70 只用于慢性温和不可预知性应激小鼠模型,CD-1 雄性退役小鼠(8 个月)60 只。SD 雄性大鼠(180 g)30 只。饲养环境室温 25℃,光暗周期 12 h,给予动物充足的食物与饮用水。
【建模方法】
1、社交失败模型建立
1.1、CD-1 小鼠领地意识建立
CD-1 小鼠单笼饲养 7 天,在此期间不更换鼠笼内垫料。
1.2、攻击型 CD-1 小鼠的筛选
将 C57 小鼠放入 CD-1 小鼠鼠笼中,观察 CD-1 小鼠在 3 min 内是否攻击 C57 以及攻击程度,记录首次攻击时间。筛选每天进行三次,连续进行三天。CD-1 小鼠合格标准:每次首次攻击时间小于 1 min,每天至少连续两次有攻击行为,至少连续两天有攻击行为。被攻击过的 C57 小鼠不能用于抑郁模型建造。
1.3、合格 C57 小鼠筛选
以糖水偏爱率为标准筛选出合格的 C57 小鼠。C57 小鼠单笼饲养,适应新环境 3 天以上,然后进行糖水试验。糖水试验适应阶段,每只小鼠分别给予 1 瓶 0.8%蔗糖水溶液和 1 瓶自来水,左右分开放置,每 12 h交换一次水瓶位置,适应 2 天。适应结束后,将小鼠禁水禁食 15 h,然后进行正式糖水偏爱试验。每只小鼠分别给予 1 瓶 0.8%蔗糖水溶液和 1 瓶自来水,记录初始时刻及 12 h 蔗糖水溶液及自来水重量,分别计算出 C57小鼠在 12 h 糖水及自来水消耗重量,计算出糖水偏爱率。实验过程中,在 6 h 交换水瓶位置。糖水偏爱率=糖水消耗量/(自来水消耗量+糖水消耗量)。挑选出糖水偏爱率大于 75%的小鼠作为合格的 C57 小鼠。
1.4、C57 小鼠接受应激刺激
模型组 C57 小鼠每 10 只一组,分别放入 CD-1 小鼠笼中,CD-1 小鼠攻击 C57 小鼠,时间为 10 min,然后用透明带孔的隔板将 CD-1 与 C57隔离,C57 小鼠能够通过视觉或嗅觉感受到来自 CD-1 的威胁,同笼饲养24 h。第二天,将同组 C57 小鼠按顺序依次移动一个位置,放入新的 CD-1小鼠笼中,CD-1 小鼠仍在自己的笼中,依次移动 C57 小鼠位置,CD-1小鼠保持不变,重复前一天的操作,C57 小鼠接受陌生的 CD-1 小鼠的攻击。C57 小鼠连续接受刺激 10 天,每天接受来自不同 CD-1 小鼠的攻击。对照组小鼠每笼饲养两只,中间用透明带孔隔板分开。最后一次攻击结束24 h,将小鼠单笼饲养,然后进行行为学检测。
1.5、体重
每两天记录一次 C57 小鼠体重,观察对照组和模型组小鼠在 10 天之中体重的变化情况。
1.6、糖水偏好实验
对照组和模型组小鼠禁水禁食 15 h 后,分别给予每只小鼠 1 瓶 0.8%,蔗糖水溶液和 1 瓶自来水,记录 12 h 蔗糖水溶液和自来水消耗量,计算糖水偏爱率。
1.7、食物摄食量实验
食物摄取量实验与糖水试验同时进行。试验前先将鼠粮分别称重,然后将鼠粮放入相应鼠笼中,24 h 后再次称量剩余鼠粮重量,计算每只 C57小鼠的摄食量。
1.8、社交实验
将 C57 和 CD-1 小鼠放入行为学测试房间至少 2 h,适应环境后再进行行为学测试。社交实验分为两个阶段,每阶段 2.5 min。首先在束缚盒中不放入 CD-1 小鼠,记录 C57 小鼠在社交区域及角落区域时间。取出C57 小鼠,将 CD-1 小鼠放入束缚盒中,1 min 后,放入 C57 小鼠,记录C57 小鼠在社交区域及角落区域的时间,分别比较 CD-1 小鼠是否存在时C57 小鼠在社交区和角落区停留时间的差异。若模型组 C57 小鼠社交时间在 CD-1 存在时小于 CD-1 不存在时,则认为是敏感小鼠,反之,则认为是非敏感小鼠。每只小鼠测试结束后要用酒精擦拭场地及束缚盒,减少不同小鼠间行为学实验的影响。
1.9、药物治疗后行为评价
将模型敏感小鼠随机分为三组,分为生理盐水组、丙咪嗪治疗组、帕罗西汀治疗组,分别腹腔注射生理盐水、丙咪嗪(20 mg/kg)、帕罗西汀(20 mg/kg)进行治疗,对照组小鼠腹腔注射生理盐水,4 周后,进行社交实验,观察药物治疗效果。
2、慢性温和不可预知性应激小鼠模型的建立
2.1、糖水偏爱基线值测定及 C57 小鼠筛选
同上述1.3部分
2.2、慢性应激刺激 C57 小鼠
将合格 C57 小鼠随机分为 4 组,分别为对照组(无应激)、生理盐水组(应激刺激+生理盐水治疗)、丙咪嗪治疗组(应激刺激+丙咪嗪治疗)和帕罗西汀治疗组(应激刺激+帕罗西汀治疗)。慢性应激因素包括:晃动鼠笼(5 min)、冷刺激(小鼠放置在冰上,1 h)、束缚(1 h)、拥挤饲养(10 只/笼,6 h)、倾斜鼠笼(45°,12 h)、禁水(12 h)、禁食(12 h)、
空笼(12 h)、湿笼(12 h)、昼夜颠倒(24 h)及令小鼠恐惧的气味(大鼠垫料,12 h)。应激小鼠每天随机接受 3 种不同的刺激,相邻两天不能接受同一种刺激,注意长时间刺激与短时间刺激配合使用,慢性应激持续5 周。在应激小鼠接受光照或气味刺激时,将对照组小鼠移至其他房间饲养。
2.3、糖水偏爱试验
详见1.6部分,糖水偏爱试验时间为 6 h,在第 3 h 交换水瓶位置。糖水偏爱试验在第 1 周、第 3 周和第 5周进行。
2.4、体重
分别测量 C57 小鼠实验前、第 1 周、第 3 周和第 5 周的体重,观察体重变化。
2.5、药物治疗
从第 4 周开始分别给对照组、敏感模型生理盐水组、丙咪嗪治疗组、帕罗西汀治疗组小鼠腹腔注射生理盐水、生理盐水、丙咪嗪(20 mg/kg)、帕罗西汀(20 mg/kg)进行治疗,治疗时间为 2 周。治疗过程中仍进行慢性应激刺激。
2.6、旷场实验
小鼠旷场将大鼠所用旷场(1 m * 1 m * 40 cm)用隔板分隔成 4 个小鼠旷场(50 cm * 50 cm * 40 cm),可供 4 只小鼠同时进行实验。将小鼠分别放入指定区域的中央,在旷场中自由活动 10 min,视频跟踪系统记录小鼠活动情况,并用软件分析各项指标。
2.7、强迫游泳实验
将 C57 小鼠放入强迫游泳实验仪(直径 12 cm,水温 25℃,水面高度 25 cm)中,让其在水中游泳 6 min,记录其在后 4 min 的不动时间。
3、慢性温和不可预知性应激大鼠模型的建立
3.1、合格 SD 大鼠筛选
3.2、慢性应激刺激 SD 大鼠
将合格的 SD 大鼠随机分为 2 组,分别为对照组和模型组。慢性应激因素包括:夹尾巴(1 min)、冷刺激(4℃冷水浴,5 min)、束缚(1 h)、拥挤饲养(10 只/笼,12 h)、倾斜鼠笼(45°,12 h)、禁水(12 h)、禁食(12 h)、空笼(12 h)、湿笼(12 h)及昼夜颠倒(24 h)。模型大鼠每天随机接受 2 种不同的刺激,相邻两天不能接受同一种刺激,注意长时间刺激与短时间刺激配合使用,慢性应激持续 5 周。
3.3、糖水偏爱试验
3.4、体重
慢性应激结束后,测量对照组及模型组大鼠体重。
3.5、旷场实验
实验在大鼠旷场(1 m * 1 m * 40 cm)中进行。将大鼠放入旷场区域中央,在旷场中自由活动 10 min,视频跟踪系统记录大鼠活动情况,并用软件分析各项指标。
4、数据统计和分析
  
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【MDL-百奥思科】拥有SPF级动物实验平台, 能为广大科研用户构建各种动物疾病模型,以及动物实验外包技术服务。具体可以构建大动物猪、犬、羊、猴,小动物裸鼠、豚鼠、大鼠、小鼠和兔子等动物模型,研究范围涵盖肿瘤类、心血管类、脑神经类、免疫系统类、骨科类、呼吸类、眼科、肝胆胃肠、环境类、化学诱导等疾病动物模型研究,迄今已成功开发成熟的人类疾病动物模型400多种,支持按需定制动物模型。具体请咨询客服。MDL也可以提供现场教学培训。
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