TRAP染色试剂盒价格

TRAP染色试剂盒价格

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品牌:研生

货号:YSRIBIO-C1454

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产品详情

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库存 :32

CAS号 :详见说明书

保质期 :详见说明书

供应商 :上海研生

保存条件 :低温冷藏

规格 :30T

实验报告:
一、TRAP染色试剂盒价格分离与培养:
    1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
    3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
    5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
    2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
    3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
    5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
    6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

中文名称:TRAP染色试剂盒价格
英文名称:
产品规格:30T

发货周期:1~3天
抗酒石酸酸性磷酸酶主要存在于正常人肺泡巨噬细胞等部位的TRAP和存在于细胞白血病人脾脏TRAP均在细胞滤泡中,并不释放入血液,血液中TRAP绝大部分来源于破骨细胞。因而测量血液中TRAP可以了解破骨细胞的功能状态。

在碱性的缓冲液中,细胞内酸酸性磷酸酶催化底物水解,其生成物进而与一种稳定的重氮盐偶联,生成不溶性的偶氮染料沉淀,当底物中存在酒石酸时,该反应只出现在特异性细胞中。
本试剂盒适用于细胞涂片、细胞爬片、血涂片、骨髓涂片、冰冻切片及石蜡切片等的染色。阳性反应为鲜红色或深红色颗粒,定位于胞浆当中。
储存条件及有效期2-8℃保存;三个月。
注意事项:
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中; 
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。


 

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