StarMut随机突变试剂盒

英文名 ：EZ-T Simple Zero pTOPO Cloning Kit

库存 ：999

供应商 ：GenStar

规格 ：20 rxn/100 rxn

随机突变是阐述蛋白质结构和功能之间的关系、改进蛋白质性能的重要工具。StarMut随机突变试剂盒基于易错PCR（error-prone PCR）技术，利用Taq DNA polymerase不具有3′→5′校对功能的特性，在特定的反应缓冲体系中，向扩增的目的基因中引入随机突变密码子。带有随机突变的扩增产物通过双酶切，连接到表达载体中构建文库，然后转化入表达宿主中，进行蛋白活性筛选。如果经一次突变反应不能获得满意的结果，可采用连续易错PCR（sequential error-prone PCR）策略，即将一次PCR扩增得到的有用突变基因作为下一次PCR扩增的模板，连续反复地进行随机诱变，使每一次获得的突变累积而产生更有意义的突变。 本试剂盒包含有优化的2xStarMut Random System、StarMut Enhancer和Sterile Water 三种组分，使用时只需加入适量的DNA板和合成的两条扩增引物，并用水补足体积，即可进行扩增反应，操作简便快速，大大减少了多次加样可能造成的出错和污染机会。2xStarMut Random System含有优化浓度的Taq DNA polymerase、dNTPs、反应缓冲液和稳定剂，可最大限度地克服常规易错PCR 技术中，由于Taq DNA polymerase本身的偏爱性造成的以GC突变为主的缺点，获得相对均衡的突变谱。碱基突变率可通过适量添加StarMut Enhancer、调整模板DNA量和改变PCR扩增循环数进行控制。下表列出以10 ng质粒DNA为模板，PCR扩增一条1 kb DNA片段（20个循环）后测序检测得到的突变率结果。需要注意的是，由于不同DNA模板的碱基组成不同、长度不一，以及不同引物的扩增效率存在差异，所以即使在相同的PCR反应条件下，两组PCR产物所得到的突变率也可能不同。因此我们建议根据实验的具体要求，首先进行多个小体系（20 μl）扩增预实验，分别加入不同体积的StarMut Enhancer（如0 μl、1μl、5 μl、10 μl等），摸索出符合目标突变率的反应条件后，再放大扩增体系。其他影响突变率的因素见【注意事项】。