人淋巴细胞分离液说明书

库存 ：46

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海研生

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：200ml

中文名称：人淋巴细胞分离液说明书
英文名称：
产品规格：200ml
发货周期：1～3天
人淋巴细胞分离液采用优质原料科学配方配制而成。适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞。本品为无菌溶液。
储存条件室温(18-25℃)避光保存。
开封后2-8℃保存。
有效期两年。
使用方法
由于各离心机的性能差异以及实验室的温度不同，最佳分离条件(离心转速、离心时间等)请根据实际摸索。
1．取新鲜抗凝血1ml，与1mlHank’s液混匀。
2．将以上液体小心加于1ml的细胞分离液的液面上。
3．以1500RPM离心15分钟。
4．此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层血浆或组织匀浆液层。第二层环状乳白色淋巴细胞层。第三层透明分离液层。第四层红细胞层
●此红细胞层，表面有悬起的部分白细胞层。收集界面上的细胞，放入含4-5毫升Hank’s液的试管中，充分混匀后，以1500-2000RPM离心10分钟。收集第二层细胞(淋巴细胞)沉淀经2次洗涤收集细胞。
实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：
1．人淋巴细胞分离液说明书用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
以下是公司正在热销产品：
 2-[[2-(二)]]醇DL-色/DL-胰化蛋白/DL-色/DL-2--3-吲哚-1-/DL-吲哚/DL-Trytophan
 1--3-D-色/D-胰化蛋白/D-2--3-吲哚-1-/D-吲哚/D-β-3-吲哚/D-Trytophan
 4-氧L-色/L-胰化蛋白/L-色/L-2--3-吲哚-1-/L-吲哚/L-Tryptophan
 CyprCBZ-L-苏/N-苄氧羰-L-苏/CBZ-L-Threonine
 亢平BOC-L-苏/N-叔氧羰-L-苏/BOC-L-Threonine
 硬脂镉DL-苏/DL-α--β-羟/(±)-2--3-羟/DL-羟/DL-异赤丝藻/DL-Theronine
 反式-4-氧查耳D-苏/D-α--β-羟/D-羟/D-异赤丝藻/D-2--3-羟/D-Theronine
 3--4-啶L-苏/L-α--β-羟/L-羟/(2S,3R)-2--3-羟/L-异赤丝藻/L-Threonine
 4-溴-3-苄醇L-羟脯/L-羟脯/反式-4-羟-L-脯/L-Hydroxyproline
 1-苊BOC-D-脯/N-叔氧羰-D-脯/BOC-D-Proline
人淋巴细胞分离液说明书15冠(>98.0%(T))英文名(EN)Monensin sodium salt特价促销  规格(SP)25G
18冠(>98.0%(GC)(T))英文名(EN)Azithromycin,98%特价促销  规格(SP)100G
1代炔(>97.0%(GC))英文名(EN)Doxycycline HCl,≥98%特价促销  规格(SP)5G
1代炔(含稳定剂铜屑)(>98.0%(GC))英文名(EN)Oxacillin sodium salt,特价促销  规格(SP)5G
1代炔(>97.0%(GC))英文名(EN)Piperacillin sodium salt,≥特价促销  规格(SP)1G
1[离子对色谱级]英文名(EN)Piperacillin特价促销  规格(SP)5G
1含的布洛芬英文名(EN)Apramycin sulfate,特价促销  规格(SP)25G
1环二单(>98%，BR)英文名(EN)Mycophenolic acid,≥98%特价促销  规格(SP)50MG
1,3二咪唑啉化物(>98.0%(HPLC)(T))英文名(EN)Validamycin特价促销  规格(SP)5G
1,2,4三唑英文名(EN)Metronidazole,特价促销  规格(SP)10G
1化咪唑鎓(>95.0%(HPLC)(T))英文名(EN)Norfloxacin,特价促销  规格(SP)5G
1海（标准品）英文名(EN)Enrofloxacin,特价促销  规格(SP)5G
1黄嘌呤英文名(EN)Florfenicol,98%特价促销  规格(SP)5G
1咪唑(>98%,BR)英文名(EN)5Fluorocytosine,98%特价促销  规格(SP)1G
1烟化物英文名(EN)Rosiglitazone maleate,特价促销  规格(SP)1G
1吲唑羧（格拉司琼质D）英文名(EN)Novobiocin Sodium,≥特价促销  规格(SP)250MG
1(标准品)英文名(EN)Cloxacillin sodium salt hydrate特价促销  规格(SP)100MG
1英文名(EN)Dihydrostreptomycin Sulphate,≥98%特价促销  规格(SP)5G
注意事项：
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。