Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒规格

库存 ：38

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海研生

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：50T|100T

中文名称：Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒规格
英文名称：
产品规格：50T|100T
发货周期：1～3天
产品背景
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。在体内，巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS从而将这些程序性死亡的细胞清除，因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应，而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。
AnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。PS外翻发生在细胞核破裂，DNA片段化以及凋亡相关蛋白出现之前，这使得AnexinV与PS的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。
检测原理
在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine，PS)位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。
Anexin-Ⅴ能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。用标记了APC的AnexinⅤ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。细胞坏死的过程中也会发生细胞膜损伤，坏死的细胞会结合AnexinV-APC。
AnexinV-APC通常与细胞膜非渗透性核酸荧光染料联合使用以检测凋亡细胞。常用的染料是7-AAD。正常细胞和早期凋亡细胞的细胞膜是完整的，核酸染料7-AAD不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，7-AAD能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。
7-AAD/AnexinV-APC试剂盒将AnexinⅤ与7-AAD匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。坏死细胞可以同时与AnexinV-APC和7-AAD结合显色，而7-AAD则被排除在活细胞(APC阴性)和早期凋亡细胞(APC阳性)之外。在没有巨噬细胞的情况下，凋亡的最后阶段会像细胞坏死一样发生整个细胞的解体，从而使凋亡晚期的细胞也同时被APC和7-AAD结合染色呈现双阳性。
储存条件染色液2-8℃避光保存；结合液2-8℃保存；长期不用-20℃保存。
AnexinV-APC染色液避免反复冻融，冻融2次以上可能会失效。长期保存分装后-20℃保存。
有效期一年。
实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：
1．Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒规格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
以下是公司正在热销产品：
 2,6-二α-萘醇/α-纳富妥/4-(4-羟-1-萘)亚-1(4H)-萘/α-对萘/对萘醇/4,4’-(α-羟亚苄)二(1-萘)/α-萘萘醌/α-萘醌/α-萘醌/α-萘/1-萘/α-Naphtholbenzein
 N-(2-苄)-N-1--3-唑/菲尼/菲尼A/3--1--唑啉-5-/1,3,5-唑/3--1--2-唑啉-5-/Phenidone
 3-氧-4-(3-氧氧)1--3--5-唑/依达拉奉/3--1--2-唑啉-5-/3--1--5-唑啉/1,3,5-唑/1--3--5-唑啉/茂-5-/PMP
 2,3,4,5-四酰1--3--4-酰唑啉/1--3--4-酰-5-唑啉/4-酰-3--1--2-唑啉-5-/萃取剂II/4-酰-3--1--5-唑啉/HPMBP/PMBP
 4-溴肉桂酯芴/锗试剂/芴/荧光/2,6,7-三羟-9-荧光/2,6,7-三羟-9--3H-呫吨-3-/9--2,3,7-三羟-6-氧蒽/Phenylfluorone
 邻氧米氏/4，4′-四二二/米蚩/米气勒氏/四对，对′-二二/4,4′-双(二)二/四米氏/Michlers ketone
 4-溴啶-2(1H)-4，4-双（二）代二/4,4-双(二)代二/代米氏/4,4′-四二代二/对,对′-四二二/4,4′-双(二)代二/Thiomichlers ketone
 2--6-(二氧)四铵/四铵/四铵/正四铵/TBAHS/IPC-TBA-HS
 2-羟萘-1-羧酯蒽/9,10-二-9-氧蒽/Anthrone
 2-茚三/并三/水合茚三/骈三/并环三/2,2-二羟-1H-茚并-1,3(2H)-二/水合三茚/宁海群/Ninhydrin
Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒规格Allyltrimethylsilane三硅762721
1Acetoxy4diethylamino2butyne4(二)2炔22396776
DICTAMNINE白鲜484297
3(Decyldimethylazaniumyl)propane1sulfonate代甜菜1015163367
Cyanuric fluoride三聚675149
Lithium tetraborate四锂12007602
20(R)Propanaxadiol参皂苷Rg338243037
Sennoside B番泻苷 B128574
Ethyl propiolate623472
Phenylacetylene炔536743
2Chlorothiophene296435
7HYDROXYCOUMARIN GLUCOSIDE茵芋苷93390
Myricetin杨梅黄529442
TRIHEXANOIN三甘油621705
Tetramethrin菊7696120
七叶树皂苷B 26339924 订购|咨询  规格 HPLC≥98%;20mg
鸟苷 118003 订购|咨询  规格 HPLC≥98%;20mg
罗红 80214831 订购|咨询  规格 HPLC≥98%;200mg
金松双黄 521346 订购|咨询  规格 HPLC≥98%;20mg
广防风苷A  订购|咨询  规格 HPLC≥98%;20mg
东莨菪 51343 订购|咨询  规格 HPLC≥98%;20mg
半齿泽兰素 855969 订购|咨询  规格 HPLC≥98%;20mg
丹B二 875313647 订购|咨询  规格 HPLC≥90%;20mg
α三联  订购|咨询  规格 HPLC≥98%;20mg
溴山莨菪 55449495 订购|咨询  规格 HPLC≥95%;20mg
土槿皮OβD葡萄糖苷 98891442 订购|咨询  规格 HPLC≥98%;20mg
山梨 50704 订购|咨询  规格 0.99;20mg
棕榈 112390 订购|咨询  规格 HPLC≥98%;25mg
异茴芹内 482279 订购|咨询  规格 HPLC≥98%;20mg
D糖 57487 订购|咨询  规格 HPLC≥99%;100mg
注意事项：
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。