XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂说明书

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英文名 ：XTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Kit

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海研生

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：500T|1000T

操作步骤(仅供参考)：
1、XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂说明书
英文名称：XTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Kit
产品规格：500T|1000T
发货周期：1～3天
XTT(二甲氧唑黄)是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，活细胞线粒体中存在与辅酶Ⅱ相关的脱氢酶，可将黄色的XTT还原成水溶性的橘黄色的甲臜。生成的甲月赞能够溶解在组织培养基中，不形成颗粒，可直接用酶联免疫检测仪检测定吸光值。
操作方法
1.96孔板加入细胞100μL/孔（约1×104），置37℃5%CO2细胞培养箱培养24小时。2.加入适当浓度的受试化合物。3.将96孔板在37℃，含5%CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4.向各孔中加入50μl的XTT检测工作液。
5.37℃下孵育1~4小时。
6.酶标仪在450nm波长处检测每孔的光密度。
结果分析
1.细胞的存活率将各测试孔的OD值减去本底OD值（完全培养基加XTT工作液，无细胞）或空白药物孔OD值（完全培养基加受试药物的不同稀释度加XTT工作液，无细胞），各重复孔的OD值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。细胞存活率%=（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
2.求出T/C=50%时的药物浓度(IC50)及T/C=10%时的药物浓度(IC90)。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 2-基-3-基-4-(3-氧氧基)啶盐酸盐酸性铝/层析铝/Activated alumina
 4-异铝/铝氧/三二铝/刚玉/金刚砂/矾土/Aluminum oxide
 3,4-二-1,2-二铝/三羟基铝/Aluminium hydroxide
 二猕猴桃内酯铝/十八水合铝/Aluminum sulfate octadecahydrate
 2-溴基-4-氧酸酯铝屑/铝/Aluminum
 3-唑羧酸酯铝丝/铝/Aluminum
 4-溴烟酸粉/铝/Aluminum
 尔它培南铝片/铝/Aluminum
 6,7-二-6-巯基-5H-唑并[1,2-α][1,2,4]三唑化物铜铁试剂/N-亚羟铵盐/N-亚胲盐/铜铁灵/N-亚胲铵/Cupferron
 7-基-1,2,3,4-四酸铜/酸铜三水物/Cupric nitrate trihydrate
XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂说明书Safranine T藏红O1克超，99%
SAA琥珀酐25克99.95%
Ruthenium(III) chloride化钌1公斤试剂级，
Ruodium (Ⅲ) Chloride Hydrate化钌水合物100毫克试剂级，
RuDP1,5-二磷-D-核糖5克BR，
Rubidium chloride化铷100克超，15/180mg
RT2,3,5-三基化四唑1毫克生物技术级，85%
Roxithromycin9-{O-[(2-基基)-基]肟基}红霉素100毫克生物技术级，17u/mg
Rotenone地利斯25克GR，99.0%
Rosolic acid玫瑰红10克IND，82%
Rosiglitazone maleate马来罗格列100毫克BR
Rose Bengal Na salt四四荧光素二10毫克超，99%
Rose Bengal玫瑰红10毫克超，99%
Rooting Powde生根粉2.5KUAR
Rnasin InhibitorRNA酶抑制剂5克BR，Ⅴ型，>125CDU/mg