Annexin V-APC/7-AAD双染细胞凋亡检测试剂盒说明书

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英文名 ：Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海研生

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：10T|20T|50T|100T发货周期1～3天

中文名称：Annexin V-APC/7-AAD双染细胞凋亡检测试剂盒说明书
英文名称：Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit
产品规格：10T|20T|50T|100T发货周期1～3天
发货周期：1～3天
7-AAD（7-amino-actinomycinD）是一种核酸染料，它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD标记DNA的强弱，将细胞分为三群7-AAD强为死亡细胞，7-AAD弱是凋亡细胞，7-AAD-为正常活力细胞。7-AAD同PI有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的最佳替代品，可与AnexinV-APC联合使用。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。
实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：
1．Annexin V-APC/7-AAD双染细胞凋亡检测试剂盒说明书用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
以下是公司正在热销产品：
 异酸基香兰酯对苯/P-苯/1,4-苯/对二氨/1,4-二氨/乌尔丝D/p-Phenylenediamine
 4-氧基邻苯二酸N,N,N,N-四基二胺/二盐酸四基对苯/N,N,N,N-四基-1,4-二胺/TMP
 4-氟-3'-二苯亚精胺/精脒/ N-(3-氨基基)-1,4-二胺/α-(γ-氨基氨)-δ-氨基烷/1,8-二氨基-4-氮辛烷/Spermidine
 环酸叶醇酯四盐酸精胺/四精胺/Spermine tetrahydrochloride
 6-硝基-2-腈精胺/O,O-二基硫代磷酰胺/精碱/精素/N,N′-双(3-氨基基)-1,4-二胺/α,δ-双(γ-氨氨基)烷/1,12-二氨基-4,9-二氮十二烷/Spermine
 N,N-二基硫代基酰基烷磺酸钠二基酰胺/N,N-二基酰胺/酰二胺/N-酰二胺/二替酰胺/DMF/DMFA
 3-溴-5-去离子酰胺/Formamide Deionized
 3-溴-5-苯酰胺/氨基/Formamide
 3-溴-4-氧代啶-1-羧酸叔酯腐胺/1,4-二胺双盐酸盐/1,4-二氨基烷双盐酸盐/1,4-二胺/腐肉胺/1,4-二胺/四亚基二胺/腐肉碱/Putrescine dihydrochloride
 3--5-腈代酰胺/酰胺/2-酰胺/IAM
Annexin V-APC/7-AAD双染细胞凋亡检测试剂盒说明书Tryptamine3-（2-基）吲哚10克BR，
Trypsin(porcine pancreas)胰蛋白酶（猪胰）500克BR，100-250u/mg
Trypsin(bovine pancreas) 胰蛋白酶（牛胰）100克BR，93%
Trypan blue台盼蓝5克超，99%
Tropaeolin O sodium salt间二25微克试剂级，，无水物
t-RNA转移核糖核（酵母）1克ACS级，99%
Trityl chloride resin三基树脂100克BR
Triton x-405曲拉通x-4051克色固
Triton x-200曲拉通x-200500毫克IND
Triton x-114二二单[(1,1,3,3-四基基)基]100毫克BR，85%
Triton x-100辛基基聚1克BR
Tris-PhenolTris平衡20毫克GR，99.5%
Trisodium trimetaphosphate磷三间酯100克CP，
Trisodium phosphate三碱式磷25克BR，
TRIS-HC1 Buffer solutionTRIS-HC1缓冲100克IND，80%
注意事项：
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。