CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒(WST-8法)说明书

库存 ：29

英文名 ：Cell Counting Kit-8

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海研生

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：100次|500次|2500次|10000次

【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒(WST-8法)说明书
英文名称：Cell Counting Kit-8
产品规格：100次|500次|2500次|10000次
发货周期：1～3天
本试剂盒是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。
WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考下图)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。
WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。
本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。
WST-8对细胞无明显毒性。加入CCK-8溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒(WST-8法)说明书待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
 栀子苷钠/苛/烧/钠氧条/苛性曹达/固碱/火碱/Sodium hydroxide
 2,4-二苯钠/Sodium fluoride
 酚四苯硼钠/四苯基硼酸钠/四苯硼酸钠/NaTBP
 柚皮素无水偏钒酸钠/钒酸钠/Sodium metavanadate
 京尼平偏钒酸钠/二水偏钒酸钠/钒酸钠/Sodium metavanadate dihydrate
 苦参碱L(-)酒石酸钠/酒石酸钠/L-酒石酸钠/L-(+)-Tartaric acid disodium salt
 莨菪碱D(-)酒石酸钠/酒石酸钠/D-酒石酸钠/2,3-二羟基二酸钠/D-(+)-Tartaric acid disodium salt
 利血平2,2-联-4,4-二羧酸钠/4,4-二羧基-2,2-联二钠/2,2-联-4,4-二酸二钠/BCA
 芦荟大黄素无水磷酸三钠/三碱式磷酸钠/原磷酸三钠/磷酸三钠/磷酸钠/Trisodium phosphate
 他唑巴坦磷酸三钠/正钠/十二水磷酸钠/磷酸三钠十二水合物/TSP
CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒(WST-8法)说明书卵巢微血管内皮细胞  规格20mg  Mouse Gehrelin Elisa kit
卵巢表层上皮细胞  规格20mg  Mouse Leptin ELISA kit
卵巢成纤维细胞  规格20mg  Mouse Eotaxin-2 ELISA Kit
羊膜间充质基质细胞  规格20mg  Mouse Eotaxin ELISA Kit
绒膜间充质基质细胞  规格20mg  Mouse CCL24 ELISA Kit
骨髓间充质干细胞  规格10mg  Mouse GH ELISA KIT
脂肪间充质干细胞  规格10mg  Mouse Somatostatin ELISA Kit
肝脏间充质干细胞  规格10mg  Mouse Ghrelin ELISA Kit
脐带间充质干细胞  规格10mg  Mouse ghrelin ELISA Kit
肺间充质干细胞  规格10mg  Mouse Epinephrine ELISA Kit
脊柱间充质干细胞  规格20mg  Mouse Neurotrophin-4，NT-4 ELISA KIT
微血管内皮细胞  规格10mg  Mouse Neurotrophin-3，NT-3 ELISA kit
上皮细胞  规格10mg  Mouse NT-4 ELISA Kit
成纤维细胞  规格20mg  Mouse NT-3 ELISA Kit
脐静脉内皮细胞  规格20mg  Mouse NSE ELISA Kit
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。