YT免疫荧光染色二抗稀释液说明

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英文名 ：详见说明书

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海邦景

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：100ml

产品名称：YT免疫荧光染色二抗稀释液说明
英文名称：YT? Secondary Antibody Dilution Buffer for Immunofluorescence
产品规格：100ml
发货周期：1～3天
本品是最新一代的快速高效封闭液，总体 效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、血清等的二抗稀释液，可以用于免疫荧光 (Immunofluorescence，IF)检测时二抗的稀释和配制。
YT™免疫荧光染色二抗稀释液可以有效节约二抗 。经本产品稀释的二抗可以在2-3周内重复使用3-5次。
YT™免疫荧光染色二抗稀释液稀释的二抗

注意事项：
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测，反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水（1:9）稀释至 1×备用。

操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
公司优势：
1.YT免疫荧光染色二抗稀释液说明具有多年的销售经验和资深的行业背景，我司秉承质量优先的理念，重视自主创新，希望广大科研工作者与我司达成长期的合作关系；
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