pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)

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英文名 ：pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)

保质期 ：一年

供应商 ：上海信裕生物科技有限公司

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pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)

pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)是信裕生物自行研发的用于检测TNF-α promoter转录活性水平的报告基因质粒。
pTNF-α-promoter-luc是以信裕生物的pGL6质粒为模板，在其多克隆位点插入了human TNF-α的启动子序列(-991bp～+1bp)，可以高灵敏度地检测human TNF-α promoter的激活水平。
TNF-α(Tumor Necrosis Factor α)，中文名为肿瘤坏死因子α，是一种非常重要的炎性细胞因子，在炎性疾病的发生发展过程中起重要作用，常作为炎症反应的重要指标。
pGL6质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
pTNF-α-promoter-luc质粒的主要信息如下：

Base pairs	6555
hTNF-α promoter	20-1010
luc2 reporter gene	1056-2708
SV40 late poly(A)signal	2743-2964
SV40 early enhancer/promoter	3012-3430
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region	3455-4249
Synthetic poly(A)signal	4274-4322
Reporter Vector primer 4(RVprimer4)binding region	4389-4408
ColE1-derived plasmid replication origin	4646
Synthetic Beta-lactamase(Ampr)coding region	5437-6297
Synthetic poly(A)signal/transcriptional pause site	6402-6555
Reporter Vector primer 3(RVprimer3)binding region	6504-6523

pTNF-α-promoter-luc质粒的图谱如下：

pTNF-α-promoter-luc的多克隆位点及TNF-α promoter的详细图谱如下：

	BglI KpnI TNF-α promoter
1	GGCCTAACTG	GCCGGTACC A	GCTCCTGGGA	GATATGGCCA	CATGTAGCGG
	CCGGATTGAC	CGGCCATGG T	CGAGGACCCT	CTATACCGGT	GTACATCGCC
51	CTCTGAGGAA	TGGGTTACAG	GAGACCTCTG	GGGAGATGTG	ACCACAGCAA
	GAGACTCCTT	ACCCAATGTC	CTCTGGAGAC	CCCTCTACAC	TGGTGTCGTT
101	TGGGTAGGAG	AATGTCCAGG	GCTATGGAAG	TCGAGTATGG	GGACCCCCCC
	ACCCATCCTC	TTACAGGTCC	CGATACCTTC	AGCTCATACC	CCTGGGGGGG
151	TTAACGAAGA	CAGGGCCATG	TAGAGGGCCC	CAGGGAGTGA	AAGAGCCTCC
	AATTGCTTCT	GTCCCGGTAC	ATCTCCCGGG	GTCCCTCACT	TTCTCGGAGG
201	AGGACCTCCA	GGTATGGAAT	ACAGGGGACG	TTTAAGAAGA	TATGGCCACA
	TCCTGGAGGT	CCATACCTTA	TGTCCCCTGC	AAATTCTTCT	ATACCGGTGT
251	CACTGGGGCC	CTGAGAAGTG	AGAGCTTCAT	GAAAAAAATC	AGGGACCCCA
	GTGACCCCGG	GACTCTTCAC	TCTCGAAGTA	CTTTTTTTAG	TCCCTGGGGT
301	GAGTTCCTTG	GAAGCCAAGA	CTGAAACCAG	CATTATGAGT	CTCCGGGTCA
	CTCAAGGAAC	CTTCGGTTCT	GACTTTGGTC	GTAATACTCA	GAGGCCCAGT
EcoRI XmaI/SmaI
351	GAATGAAAGA	AGAAGGCCTG	CCCCAGTGGG	GTCTGTGAAT	TCCCGGGGGT
	CTTACTTTCT	TCTTCCGGAC	GGGGTCACCC	CAGACACTTA	AGGGCCCCCA
XmaI/SmaI
401	GATTTCACTC	CCCGGGGCTG	TCCCAGGCTT	GTCCCTGCTA	CCCCCACCCA
	CTAAAGTGAG	GGGCCCCGAC	AGGGTCCGAA	CAGGGACGAT	GGGGGTGGGT
451	GCCTTTCCTG	AGGCCTCAAG	CCTGCCACCA	AGCCCCCAGC	TCCTTCTCCC
	CGGAAAGGAC	TCCGGAGTTC	GGACGGTGGT	TCGGGGGTCG	AGGAAGAGGG
501	CGCAGGGACC	CAAACACAGG	CCTCAGGACT	CAACACAGCT	TTTCCCTCCA
	GCGTCCCTGG	GTTTGTGTCC	GGAGTCCTGA	GTTGTGTCGA	AAAGGGAGGT
551	ACCCCGTTTT	CTCTCCCTCA	AGGACTCAGC	TTTCTGAAGC	CCCTCCCAGT
	TGGGGCAAAA	GAGAGGGAGT	TCCTGAGTCG	AAAGACTTCG	GGGAGGGTCA
601	TCTAGTTCTA	TCTTTTTCCT	GCATCCTGTC	TGGAAGTTAG	AAGGAAACAG
	AGATCAAGAT	AGAAAAAGGA	CGTAGGACAG	ACCTTCAATC	TTCCTTTGTC
651	GCCACAGACC	TGGTCCCCAA	AAGAAATGGA	GGCAATAGGT	TTTGAGGGGC
	CGGTGTCTGG	ACCAGGGGTT	TTCTTTACCT	CCGTTATCCA	AAACTCCCCG
701	ATGGGGACGG	GGTTCAGCCT	CCAGGGTCCT	ACACACAAAT	CAGTCAGTGG
	TACCCCTGCC	CCAAGTCGGA	GGTCCCAGGA	TGTGTGTTTA	GTCAGTCACC
751	CCCAGAAGAC	CCCCCTCGGA	ATCGGAGCAG	GGAGGATGGG	GAGTGTGAGG
	GGGTCTTCTG	GGGGGAGCCT	TAGCCTCGTC	CCTCCTACCC	CTCACACTCC
801	GGTATCCTTG	ATGCTTGTGT	GTCCCCAACT	TTCCAAATCC	CCGCCCCCGC
	CCATAGGAAC	TACGAACACA	CAGGGGTTGA	AAGGTTTAGG	GGCGGGGGCG
851	GATGGAGAAG	AAACCGAGAC	AGAAGGTGCA	GGGCCCACTA	CCGCTTCCTC
	CTACCTCTTC	TTTGGCTCTG	TCTTCCACGT	CCCGGGTGAT	GGCGAAGGAG
SacI
901	CAGATGAGCT	CATGGGTTTC	TCCACCAAGG	AAGTTTTCCG	CTGGTTGAAT
	GTCTACTCGA	GTACCCAAAG	AGGTGGTTCC	TTCAAAAGGC	GACCAACTTA
951	GATTCTTTCC	CCGCCCTCCT	CTCGCCCCAG	GGACATATAA	AGGCAGTTGT
	CTAAGAAAGG	GGCGGGAGGA	GAGCGGGGTC	CCTGTATATT	TCCGTCAACA
PstI
-1BglIIHindIII
1001	TGGCACACCC	AGATCTGCAG	AAGCTTGGCA	ATCCGGTACT	GTTGGTAAAG
	ACCGTGTGGG	TCTAGACGTC	TTCGAACCGT	TAGGCCATGA	CAACCATTTC

pTNF-α-promoter-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pTNF-α-promoter-luc)包括：

Aat II	Afl II	Asc I	Ase I	BsaA I	BsiW I	BspM II
BssH II	Eco72 I	EcoR V	Mlu I	Nde I	Nhe I	Nru I
PaeR7 I	Pme I	Pml I	Psp1406 I	Rsr II	SnaB I	Spl I
Srf I	Vsp I	Xcm I	Xho I

pTNF-α-promoter-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut ppTNF-α-promoter-luc once)包括：

Sfi I	GGCCN,NNN`NGGCC	9		EcoN I	CCTNN`N,NNAGG	3930
Bgl I	GCCN,NNN`NGGC	9		BsiC I	TT`CG,AA	4325
Acc65 I	G`GTAC,C	15		BstB I	TT`CG,AA	4325
Asp718	G`GTAC,C	15		Sal I	G`TCGA,C	4339
Kpn I	G,GTAC`C	19		ApaL I	G`TGCA,C	4903
Bsa I	GGTCTC 7/11	66		HgiE II	ACCNNNNNNGGT	-1/13 5168
EcoR I	G`AATT,C	388		Not I	GC`GGCC,GC	5409
Tth111 I	GACN`N,NGTC	661		BstE II	G`GTNAC,C	5436
Sac I	G,AGCT`C	911		Ahd I	GACNN,N`NNGTC	5511
Bgl II	A`GATC,T	1012		Pvu I	CG,AT`CG	5881
Hind III	A`AGCT,T	1022		Sac II	CC,GC`GG	5905
BsrG I	T`GTAC,A	1547		Bst1107 I	GTA|TAC	6021
Dra III	CAC,NNN`GTG	2203		Xca I	GTA|TAC	6021
Mun I	C`AATT,G	2883		Spe I	A`CTAG,T	6340
BamH I	G`GATC,C	2976		BsmB I	CGTCTC 7/11	6353

pTNF-α-promoter-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
RVprimer3(6504-6523):
CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
pTNF-α-promoter-luc的全序列信息： D2480-pTNF-α-promoter-luc-seq.txt
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
XY-2480-1μg	pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)	1μg
XY-2480-100μg	pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)	100μg
—	说明书	1份

保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明：
1. 首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pTNF-α-promoter-luc可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用信裕生物的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
4. LPS等是常见的可以激活TNF-α的转录的试剂，可以用作pTNF-α-promoter-luc报告基因检测时的阳性对照。