pCMV-GFP-LC3B

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英文名 ：pCMV-GFP-LC3B

保质期 ：一年

供应商 ：上海信裕生物科技有限公司

保存条件 ：-20℃保存。

规格 ：1μg;100μg

pCMV-GFP-LC3B

pCMV-GFP-LC3B是信裕生物自行研发的在哺乳动物细胞中表达GFP标签的人源LC3B 融合蛋白的质粒。该质粒含有CMV启动子，为卡那霉素抗性，转染细胞后能够在靶细胞中高效表达绿色荧光蛋白GFP标签的LC3B的融合蛋白，呈现明亮的绿色荧光，可以用于细胞自噬(autophagy)的研究。本质粒转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达融合蛋白的细胞株。
LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3最初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3 (MAP1LC3)。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族，其中对于LC3B的研究最为广泛。到目前为止，LC3B被认为是细胞自噬信号通路最为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白，从而暴露出C端的甘氨酸，人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中，其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程，以ATG7为E1样激活酶(E1-like activating enzyme)，以ATG3为E2样连接酶(E2-like conjugation enzyme)，以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶(E3-like ligase)，在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰(phosphatidylethanolamine, PE)而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬体(autophagosome)的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后，自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其极强的疏水性，在SDS-PAGE电泳时，LC3B II比LC3B I迁移得更快，其表观分子量分别为14kD和16kD。在用pCMV-GFP-LC3B转染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以斑点的形式表现出来(LC3B dots or punctae)。
自噬(Autophagy)是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关，在饥饿等不利的环境条件下，细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料，促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。
pCMV-GFP-LC3B质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
GFP	698-1411
LC3B	1424-1801
T7 promoter and T7 primer binding site	1904-1925
SV40 polyA signal	1937-2320
f1 origin of ss-DNA replication	2458-2762
bla promoter	2787-2911
SV40 promoter	2931-3269
Neomycin/kanamycin resistance ORF	3304-4095
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	4096-4554
pUC origin	4683-5350

pCMV-GFP-LC3B质粒(5402bp)的图谱如下：

pCMV-GFP-LC3B表达基因的详细图谱如下：

	NotI SmaI GFP
651	GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTATG
	CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGATAC
701	AGCAAGGGAG AAGAACTCTT TACTGGTGTT GTCCCAATTC TGGTTGAGCT
	TCGTTCCCTC TTCTTGAGAA ATGACCACAA CAGGGTTAAG ACCAACTCGA
751	GGATGGTGAT GTGAATGGCC ACAAATTCTC TGTGTCTGGT GAAGGTGAAG
	CCTACCACTA CACTTACCGG TGTTTAAGAG ACACAGACCA CTTCCACTTC
801	GAGATGCAAC TTATGGAAAG CTGACTCTGA AGTTCATTTG TACAACAGGA
	CTCTACGTTG AATACCTTTC GACTGAGACT TCAAGTAAAC ATGTTGTCCT
851	AAGCTGCCAG TGCCTTGGCC AACTCTGGTG ACCACCCTGA CTTATGGTGT
	TTCGACGGTC ACGGAACCGG TTGAGACCAC TGGTGGGACT GAATACCACA
901	TCAATGTTTC AGCAGGTACC CTGACCACAT GAAGCAGCAT GACTTCTTTA
	AGTTACAAAG TCGTCCATGG GACTGGTGTA CTTCGTCGTA CTGAAGAAAT
951	AATCTGCAAT GCCAGAAGGT TATGTTCAGG AGAGGACAAT CTTCTTTAAG
	TTAGACGTTA CGGTCTTCCA ATACAAGTCC TCTCCTGTTA GAAGAAATTC
1001	GATGATGGAA ATTATAAGAC AAGGGCAGAA GTGAAGTTTG AAGGTGATAC
	CTACTACCTT TAATATTCTG TTCCCGTCTT CACTTCAAAC TTCCACTATG
1051	ACTGGTTAAC AGAATTGAGC TGAAAGGCAT TGATTTTAAG GAAGATGGAA
	TGACCAATTG TCTTAACTCG ACTTTCCGTA ACTAAAATTC CTTCTACCTT
1101	ACATTCTGGG TCACAAGCTG GAGTACAACT ATAATTCTCA CAATGTTTAC
	TGTAAGACCC AGTGTTCGAC CTCATGTTGA TATTAAGAGT GTTACAAATG
1151	ATTATGGCAG ATAAGCAGAG GAATGGAATT AAGGCTAATT TCAAGATTAG
	TAATACCGTC TATTCGTCTC CTTACCTTAA TTCCGATTAA AGTTCTAATC
1201	ACACAACATT GAGGATGGAT CTGTCCAACT GGCAGACCAT TACCAGCAGA
	TGTGTTGTAA CTCCTACCTA GACAGGTTGA CCGTCTGGTA ATGGTCGTCT
1251	ACACCCCTAT TGGTGATGGC CCAGTTCTCC TCCCAGATAA TCACTATCTC
	TGTGGGGATA ACCACTACCG GGTCAAGAGG AGGGTCTATT AGTGATAGAG
1301	AGCACTCAAT CTGCTCTGTC CAAAGACCCT AATGAGAAAA GAGACCACAT
	TCGTGAGTTA GACGAGACAG GTTTCTGGGA TTACTCTTTT CTCTGGTGTA
1351	GGTCCTCCTG GAGTTTGTGA CAGCAGCAGG AATTACTCTG GGAATGGATG
	CCAGGAGGAC CTCAAACACT GTCGTCGTCC TTAATGAGAC CCTTACCTAC
	LC3B
1401	AGCTGTACAA GGGAGGTGGA TCCATGCCGT CGGAGAAGAC CTTCAAGCAG
	TCGACATGTT CCCTCCACCT AGGTACGGCA GCCTCTTCTG GAAGTTCGTC
1451	CGCCGCACCT TCGAACAAAG AGTAGAAGAT GTCCGACTTA TTCGAGAGCA
	GCGGCGTGGA AGCTTGTTTC TCATCTTCTA CAGGCTGAAT AAGCTCTCGT
1501	GCATCCAACC AAAATCCCGG TGATAATAGA ACGATACAAG GGTGAGAAGC
	CGTAGGTTGG TTTTAGGGCC ACTATTATCT TGCTATGTTC CCACTCTTCG
1551	AGCTTCCTGT TCTGGATAAA ACAAAGTTCC TTGTACCTGA CCATGTCAAC
	TCGAAGGACA AGACCTATTT TGTTTCAAGG AACATGGACT GGTACAGTTG
1601	ATGAGTGAGC TCATCAAGAT AATTAGAAGG CGCTTACAGC TCAATGCTAA
	TACTCACTCG AGTAGTTCTA TTAATCTTCC GCGAATGTCG AGTTACGATT
1651	TCAGGCCTTC TTCCTGTTGG TGAACGGACA CAGCATGGTC AGCGTCTCCA
	AGTCCGGAAG AAGGACAACC ACTTGCCTGT GTCGTACCAG TCGCAGAGGT
1701	CACCAATCTC AGAGGTGTAT GAGAGTGAGA AAGATGAAGA TGGATTCCTG
	GTGGTTAGAG TCTCCACATA CTCTCACTCT TTCTACTTCT ACCTAAGGAC
1751	TACATGGTCT ATGCCTCCCA GGAGACGTTC GGGATGAAAT TGTCAGTGTA
	ATGTACCAGA TACGGAGGGT CCTCTGCAAG CCCTACTTTA ACAGTCACAT
	PstI
	HindIII EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI SpeI
1801	AAGCTTCTGC AGGAATTCGA TATCGTCGAC AGATCTCTCG AGTCTAGAAC
	TTCGAAGACG TCCTTAAGCT ATAGCAGCTG TCTAGAGAGC TCAGATCTTG
	ApaI
1851	TAGTGGGCCC GGTACCTTAA TTAATTAAGG TACCAGGTAA GTGTACCCAA
	ATCACCCGGG CCATGGAATT AATTAATTCC ATGGTCCATT CACATGGGTT

pCMV-GFP-LC3B中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-GFP-LC3B)包括：

AclI	AfeI	AflII	AgeI	AhdI	AscI	AsiSI
BbvCI	BcgI	BlpI	BmgBI	Bpu10I	BsgI	BsiWI
BspEI	BspQI	BssHII	BstZ17I	EarI	EcoNI	FseI
NruI	PflMI	PmeI	PmlI	PpuMI	PshAI	PspXI
SapI	SbfI	ScaI	SgrAI	SwaI	XcmI

pCMV-GFP-LC3B中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-GFP-LC3B once)包括：

NdeI	CA`TA,TG	240	XhoI	C`TCGA,G	1837
SnaBI	TAC|GTA	346	XbaI	T`CTAG,A	1843
NheI	G`CTAG,C	597	SpeI	A`CTAG,T	1849
BmtI	G,CTAG`C	597	PspOMI	G`GGCC,C	1855
SacII	CC,GC`GG	660	ApaI	G,GGCC`C	1855
AleI	CACNN|NNGTG	661	PvuI	CG,AT`CG	1935
NotI	GC`GGCC,GC	668	BclI	T`GATC,A	2091
TspMI	C`CCGG,G	680	MfeI	C`AATT,G	2184
XmaI	C`CCGG,G	680	BtsI	GCAGTG,NN`	2271
SmaI	CCC|GGG	682	MluI	A`CGCG,T	2320
SrfI	GCCC|GGGC	682	BsaXI	,NNN` (N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`	2481
BstEII	G`GTNAC,C	877	DraIII	CAC,NNN`GTG	2547
XmnI	GAANN|NNTTC	1439	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	3204
BbsI	GAAGACNN`NNNN,	1442	ClaI	AT`CG,AT	3272
HindIII	A`AGCT,T	1801	BspDI	AT`CG,AT	3272
PstI	C,TGCA`G	1807	KasI	G`GCGC,C	3431
EcoRI	G`AATT,C	1813	PluTI	G,GCGC`C	3431
EcoRV	GAT|ATC	1821	NarI	GG`CG,CC	3432
SalI	G`TCGA,C	1825	SfoI	GGC|GCC	3433
AccI	GT`MK,AC	1826	RsrII	CG`GWC,CG	3948
BglII	A`GATC,T	1831	ApaLI	G`TGCA,C	5036
PaeR7I	C`TCGA,G	1837	PciI	A`CATG,T	5350

pCMV-GFP-LC3B质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
T3 primer (620-639): 5´-AATTAACCCTCACTAAAGGG-3´
T7 primer (1904-1925): 5´-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3´
pCMV-GFP-LC3B的全序列信息请参考信裕生物网站上该质粒的信息。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
XY-2815-1μg	pCMV-GFP-LC3B	1μg
XY-2815-100μg	pCMV-GFP-LC3B	100μg
—	说明书	1份

保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。