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英文名 ：pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒)
保质期 ：一年
供应商 ：上海信裕生物科技有限公司
保存条件 ：-20℃保存。
规格 ：1μg;100μg
pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒)
pFastBac1-EGFP是以pFastBac1为基础构建的用于在昆虫细胞表达EGFP的质粒。在polyhedrin (PH)启动子的作用下，可以高效启动EGFP在昆虫细胞(如Sf9和Sf21等)中的表达。
在采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达目的蛋白时，pFastBac1-EGFP可以用作监测转染、病毒包装和目的蛋白表达效果的对照质粒。表达的EGFP有很强的绿色荧光，在荧光显微镜下可以非常方便地观察转染、病毒包装和表达的效果。
pFastBac1是基于Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而设计的表达载体。Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是由Luckow等人于1993年发展的一种快速而有效产生重组杆状病毒的方法。该系统主要包括以下两个组分：(1)用于插入目的基因的pFastBac载体，目的基因如EGFP等插入后受杆状病毒特异性启动子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin启动子调控表达；(2)含杆状病毒穿梭载体bacmid (bMON14272, 136kb)和辅助质粒(helper plasmid，用于表达转座必须的转座蛋白)的大肠杆菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。将pfastBac重组质粒转化该菌株可发生pfastBac重组质粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7发生转座，从而形成重组的bacmid。位点特异的转座会破坏宿主的lacZα基因，从而可通过蓝白斑筛选重组克隆。PCR等方法鉴定重组克隆后，提取重组的bacmid转染昆虫细胞，可以产生重组杆状病毒，并表达目的蛋白如EGFP等。扩增重组的杆状病毒并感染昆虫细胞，就可以大量表达纯化目的蛋白了。
pFastBac1-EGFP质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide |
Position |
| f1 origin |
2-457 |
| Ampicillin resistance gene |
589-1449 |
| pUC origin |
1594-2267 |
| Tn 7R |
2511-2735 |
| Gentamicin resistance gene |
2802-3335 |
| Polyhedrin promoter (PPH) |
3904-4032 |
| EGFP |
4038-4757 |
| SV40 polyadenylation signal |
4794-5021 |
| Tn 7L |
5050-5215 |
pFastBac1-EGFP质粒(5397bp)的图谱如下：
pFastBac1-EGFP的详细图谱如下：
| |
BamHI EGFP |
| 4031 |
|
GTGAGCAAGG |
GCGAGGAGCT |
GTTCACCGGG |
|
| |
|
CACTCGTTCC |
CGCTCCTCGA |
CAAGTGGCCC |
|
| |
| 4081 |
TCCTGGTCGA |
GCTGGACGGC |
GACGTAAACG |
GCCACAAGTT |
|
| |
AGGACCAGCT |
CGACCTGCCG |
CTGCATTTGC |
CGGTGTTCAA |
|
| |
| 4131 |
GGCGAGGGCG |
AGGGCGATGC |
CACCTACGGC |
AAGCTGACCC |
|
| |
CCGCTCCCGC |
TCCCGCTACG |
GTGGATGCCG |
TTCGACTGGG |
|
| |
| 4181 |
CTGCACCACC |
GGCAAGCTGC |
CCGTGCCCTG |
GCCCACCCTC |
|
| |
GACGTGGTGG |
CCGTTCGACG |
GGCACGGGAC |
CGGGTGGGAG |
|
| |
| 4231 |
TGACCTACGG |
CGTGCAGTGC |
TTCAGCCGCT |
ACCCCGACCA |
|
| |
ACTGGATGCC |
GCACGTCACG |
AAGTCGGCGA |
TGGGGCTGGT |
|
| |
| 4281 |
CACGACTTCT |
TCAAGTCCGC |
CATGCCCGAA |
GGCTACGTCC |
|
| |
GTGCTGAAGA |
AGTTCAGGCG |
GTACGGGCTT |
CCGATGCAGG |
|
| |
| 4331 |
CATCTTCTTC |
AAGGACGACG |
GCAACTACAA |
GACCCGCGCC |
|
| |
GTAGAAGAAG |
TTCCTGCTGC |
CGTTGATGTT |
CTGGGCGCGG |
|
| |
| 4381 |
TCGAGGGCGA |
CACCCTGGTG |
AACCGCATCG |
AGCTGAAGGG |
|
| |
AGCTCCCGCT |
GTGGGACCAC |
TTGGCGTAGC |
TCGACTTCCC |
|
| |
| 4431 |
AAGGAGGACG |
GCAACATCCT |
GGGGCACAAG |
CTGGAGTACA |
|
| |
TTCCTCCTGC |
CGTTGTAGGA |
CCCCGTGTTC |
GACCTCATGT |
|
| |
| 4481 |
CCACAACGTC |
TATATCATGG |
CCGACAAGCA |
GAAGAACGGC |
|
| |
GGTGTTGCAG |
ATATAGTACC |
GGCTGTTCGT |
CTTCTTGCCG |
|
| |
| 4531 |
ACTTCAAGAT |
CCGCCACAAC |
ATCGAGGACG |
GCAGCGTGCA |
|
| |
TGAAGTTCTA |
GGCGGTGTTG |
TAGCTCCTGC |
CGTCGCACGT |
|
| |
| 4581 |
CACTACCAGC |
AGAACACCCC |
CATCGGCGAC |
GGCCCCGTGC |
|
| |
GTGATGGTCG |
TCTTGTGGGG |
GTAGCCGCTG |
CCGGGGCACG |
|
| |
| 4631 |
CAACCACTAC |
CTGAGCACCC |
AGTCCGCCCT |
GAGCAAAGAC |
|
| |
GTTGGTGATG |
GACTCGTGGG |
TCAGGCGGGA |
CTCGTTTCTG |
|
| |
| 4681 |
AGCGCGATCA |
CATGGTCCTG |
CTGGAGTTCG |
TGACCGCCGC |
|
| |
TCGCGCTAGT |
GTACCAGGAC |
GACCTCAAGC |
ACTGGCGGCG |
|
| |
HindIII |
| 4731 |
CTCGGCATGG |
ACGAGCTGTA |
|
CTTGTCGAGA |
AGTACTAGAG |
| |
GAGCCGTACC |
TGCTCGACAT |
|
GAACAGCTCT |
TCATGATCTC |
pFastBac1-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-EGFP)包括：
| AatII |
Acc65I |
AfeI |
AflII |
AgeI |
ApaI |
AscI |
| AsiSI |
BbvCI |
BfuAI |
BlpI |
BmgBI |
BmtI |
BsiWI |
| BspDI |
BspMI |
BssHII |
BstAPI |
BstBI |
BstEII |
Bsu36I |
| ClaI |
CspCI |
Eco53kI |
EcoNI |
EcoO109I |
EcoRI |
FseI |
| KasI |
KpnI |
MluI |
NarI |
NdeI |
NheI |
NotI |
| NruI |
NsiI |
PacI |
PaeR7I |
PflMI |
PluTI |
PmeI |
| PmlI |
PpuMI |
PshAI |
PspOMI |
PspXI |
PstI |
PvuII |
| RsrII |
SacI |
SalI |
SbfI |
SexAI |
SfiI |
SfoI |
| SgrAI |
SmaI |
SpeI |
SphI |
SrfI |
StuI |
SwaI |
| TspMI |
XbaI |
XcmI |
XhoI |
XmaI |
ZraI |
pFastBac1-EGFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pFastBac1-EGFP once)包括：
| NgoMIV |
G`CCGG,C |
127 |
|
BsmBI |
CGTCTCN`NNNN, |
3182 |
| NaeI |
GCC|GGC |
129 |
|
PflFI |
GACN`N,NGTC |
3228 |
| BanII |
G,RGCY`C |
157 |
|
Tth111I |
GACN`N,NGTC |
3228 |
| BsaHI |
GR`CG,YC |
836 |
|
BbsI |
GAAGACNN`NNNN, |
3757 |
| PvuI |
CG,AT`CG |
1005 |
|
SnaBI |
TAC|GTA |
3881 |
| FspI |
TGC|GCA |
1153 |
|
AccI |
GT`MK,AC |
3883 |
| AlwNI |
CAG,NNN`CTG |
1852 |
|
BstZ17I |
GTA|TAC |
3884 |
| BseYI |
C`CCAG,C |
1960 |
|
BsmFI |
GGGAC(N)10`NNNN, |
4000 |
| TfiI |
G`AWT,C |
2290 |
|
BamHI |
G`GATC,C |
4032 |
| SapI |
GCTCTTCN`NNN, |
2381 |
|
NcoI |
C`CATG,G |
4036 |
| BspQI |
GCTCTTCN`NNN, |
2381 |
|
HindIII |
A`AGCT,T |
4758 |
| MscI |
TGG|CCA |
2709 |
|
MfeI |
C`AATT,G |
4873 |
| BstXI |
CCAN,NNNN`NTGG |
2713 |
|
HpaI |
GTT|AAC |
4886 |
| SacII |
CC,GC`GG |
2766 |
|
BclI |
T`GATC, |
5022 |
| BaeI |
,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` |
2798 |
|
AvrII |
C`CTAG,G |
5037 |
| EcoRV |
GAT,ATC |
2825 |
|
|
|
pFastBac1-EGFP的全序列信息请参考信裕生物的网站上该质粒的信息。
pFastBac1-EGFP质粒使用信裕生物研发的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞的效果参考图1。
图1. pFastBac1-EGFP质粒转化DH10Bac，获得的重组bacmid用信裕生物生产的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞4天后的效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。
包装清单：
| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
| XY-2802 |
pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒) |
1μg |
| — |
说明书 |
1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
