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英文名 :详见说明书
CAS号 :详见说明书
保质期 :详见说明书
供应商 :上海邦景
保存条件 :低温冷藏
规格 :100T
产品名称:DNA损伤/断裂分析试剂盒(IF FM HCS法,橙/绿/蓝)规格英文名称:
产品规格:100T
发货周期:1~3天
哺乳动物细胞中,双链断裂(DSB)的基因组DNA 是一种潜在的致命病变。现已确知DSB 的形成为导致H2A 组蛋白的磷酸化。具体来说,在DNS 双链断裂处形成DNA 灶的过程中,DNA 损伤诱导剂可以诱导组蛋白变体H2AX 的在Ser139 位点上的磷酸化。磷酸化的H2AX 有利于募集蛋白质从而帮助DSB 部位进行修复。在哺乳动物细胞中,磷脂酰肌醇3-激酶样蛋白激酶,如ATM,ATR、DNA-PKCs 蛋白,以及磷酸化的组蛋白变体,H2AX。
使用方法:
1. 悬浮细胞,2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎,造成假阳性,过短,细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶消化液,加入细胞培养液终止消化,2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS,洗涤细胞2次(2000rpm x 5min),收集细胞2~5×105 。
3. 离心弃上清,加入500μL结合缓冲液,轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
唾液酸,英文名或英文缩写:NAN,级别:BR,98%,规格:100毫克
100203γ环糊精98%Cyclohexapentylose
PCRDNAMARKERWITHLOADINGDYEPCR Marker, 含上样缓冲液生物技术级蓝色液体FROZENsigma
N乙基 1Ethylpiper,≥98.0 % 5308258 25G 通用试剂
十四烷基钠 Sodium 1tetradecanesulfonate (99%) 2 1G 通用试剂
微量游离血红蛋白测试盒 比色法 50管/样 国产
HProOBzloHClL脯酸苄酯盐酸盐5克特,98.0%
聚醇缩丁全 Polyvinyl butyrcl 632
苄酯/苯基甲基酯/苯/苄酯/Benzyl acetate CP,98% 500毫升 国产/进口
/亚胺/己/放线酮//32(3,5二甲基2氧代基)2羧基乙基二酰胺/亚胺/Actidione 超,98%, 1克 国产
LArginineLaspartatesaltL精酸L天门冬酸25克BR,98%
2异环0酰胺IfosfaMide
2Thiopxenecarboxamide, 5chloroN[3[[3,5dimetxyl4(3oxo4 2306207
2吡嗪 2Pyrcarboxylic Acid Methyl Ester... 90 5G 通用试剂
四基化铵/化四铵/Tetraheptylammonium bromide 特,99% 5克 国产/进口
Caki-1, 人透明细胞癌皮肤转移细胞 Human 现货
RLFs, 大鼠肺成纤维细胞
Ishikawa, 人内膜癌细胞系 Human 现货
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DNA损伤/断裂分析试剂盒(IF FM HCS法,橙/绿/蓝)规格小鼠骨髓间充质干细胞(EGFP标记) Mouse
CM-M121小鼠角膜内皮细胞完全培养基100mL
心房成纤维细胞 (HCFaa)( 5×105 )
野生型人c-kit受体细胞株;A7d 小鼠肺动脉成纤维细胞完全培养基 100mL
杂交瘤(B类);Z172A4C4C6F3G12
CD300C Others Human 人 CD300C / CMRF-35 / IGSF16 人细胞裂解液 (阳性对照)
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
注意事项:
DNA损伤/断裂分析试剂盒(IF FM HCS法,橙/绿/蓝)规格尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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