TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC标记POD法,通用)说明

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英文名 ：详见说明书

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海邦景

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：20T|50T|100T

公司优势：
1. TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC标记POD法,通用)说明具有多年的销售经验和资深的行业背景，我司秉承质量优先的理念，重视自主创新，希望广大科研工作者与我司达成长期的合作关系；
2.公司不仅与各大高校、科研机构以及研发性企业有着合作关系，还与国际接轨，我司代理多种知名的国际品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。
产品名称：TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC标记POD法,通用)说明
英文名称：
产品规格：20T|50T|100T
发货周期：1～3天
TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒（FITC 标记/POD 法）是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况，其原理是生物素（biotin）标记的dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂DNA 的3’-OH 末端，再以streptavidin-FITC 与生物素结合，使结果可用荧光显微镜检测；荧光素亦可被偶联过氧化物酶Peroxidase（POD）的抗荧光素抗体(POD-conjug

操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。

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吩嗪/二苯并吡嗪/二苯并对二嗪/吩噁嗪/Phen BR，98%， 1克 国产/进口
L鸟酸L天冬酸盐100克
921异乙酯 ≥98%etxyl isobutyrate
metxyl 3(2,5dioxo2,5dixy7no1Hpyrrol1yl)thiopxene2carbo 55232
膦酰基三乙酯 Triethyl phosphonoacetate,98% 80 25G 通用试剂
六(青氧基) Nc
LOVO/Adr   结肠癌阿霉素耐药株
HCT-8/FU   人结肠癌尿嘧啶耐药株
HCT/Taxol   人结肠癌紫杉醇耐药
SGC7901/DDP   人胃癌顺铂耐药株
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC标记POD法,通用)说明K562/Adr 人白血病阿霉素耐药株
CL-0107HGC-27(人胃癌细胞)5×106cells/瓶×2
12. 骨骼细胞系统
小鼠胚胎成纤维细胞;3T3-Swiss albino 大鼠角膜上皮细胞完全培养基 100mL
豹猫肺成纤维样细胞;LCL4
IL10 Others Human 人 IL10 / Ierleukin-10 人细胞裂解液 (阳性对照)
注意事项：
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测，反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水（1:9）稀释至 1×备用。