线粒体呼吸链复合物III试剂盒(辅酶Q-细胞色素C还原酶)哪家好

库存 ：45

英文名 ：Electron transport chain Complex III assay kit

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海研生

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：详见说明书

中文名称：线粒体呼吸链复合物III试剂盒(辅酶Q-细胞色素C还原酶)哪家好
英文名称：Electron transport chain Complex III assay kit
产品规格：20管/10样
发货周期：1～3天
发货周期：1～3天
检测指标：线粒体呼吸链复合物III
线粒体呼吸链复合物III（辅酶Q-细胞色素C 还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用还原性合成辅酶Q 同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中细胞色素C 还原后峰值的增高，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的辅酶Q-细胞色素C 还原酶的特异性活性检测。可用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
线粒体呼吸链复合物III，通常称为辅酶Q－细胞色素C还原酶、细胞色素还原酶或bc1复合物（ubiquinolcytochrome c oxidoreductase；cytochrome reductase；bc1 complex），是线粒体电子传递链的中心元素：含有十一个亚单位，包括细胞色素b（Cytochrome b），细胞色素c1（cytochrome c1）和Rieske铁硫蛋白（Rieskeiron-sulfur protein），通过Q循环（Q cycle）进行催化作用。其特征性的酶活性是抗霉素敏感的辅酶Q－细胞色素C还原酶。复合物III催化氧化型细胞色素C被还原为还原型细胞色素C，线粒体内电子由供体还原型泛醌（ubiquinol；UQH2）或还原型辅酶Q（reduced Coenzyme Q；CoQH2）传递到细胞色素C上的能量转移反应，进行呼吸链传递。该酶异常会导致心肌疾病。辅酶Q－细胞色素C还原酶反应系统测定氧化型细胞色素C的浓度变化。基于还原型泛醌或还原型辅酶Q底物，在抗霉素存在与否的情况下，通过辅酶Q-细胞色素C还原酶的催化，转化成泛醌（ubiquinone；UQ）或辅酶Q（Coenzyme Q；CoQ），同时氧化型细胞色素C，转化为还原型细胞色素C，在分光光度仪下产生吸光峰值的变化（550nm 波长），由此定量测定辅酶Q－细胞色素C还原酶的特异活性。
试剂盒组份：
缓冲液（Reagent A） 20 毫升
底物液（Reagent E） 500 微升
反应液A（Reagent B） 125 微升
反应液B（Reagent C） 125 微升
阴性液（Reagent D） 2 毫升
底物液（Reagent E） 500 微升
专性液（Reagent F） 200 微升
保存方式
－20℃冰箱避光保存，避免反复冻融；反应液B（Reagent C）和底物液（Reagent E），有效期3个月
实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：
1．线粒体呼吸链复合物III试剂盒(辅酶Q-细胞色素C还原酶)哪家好用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
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注意事项：
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。