跗线螨属通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书

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英文名 ：Tarsonemus spp.

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海博湖

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：50T

荧光化学物质：
跗线螨属通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：
1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。
2. SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。
3. 分子信标：是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
 

产品名称	跗线螨属通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书
英文名称	Tarsonemus spp.
货号	BHR2170

实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性定量方法，已得到全世界的公认，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。

通用原则：
1， 先选择好探针，然后设计引物使其尽可能的靠近于探针。
2， 扩增子的长度应不超过400bp，理想的最好能在100－150bp内，扩增片断约短，有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片断也容易保证分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之间，GC富含区容易产生非特异反应，从而会导致扩增效率的降低，及在SG分析中非特异信号。
4， 为了保证效率和重复性，应避免重复的核苷酸序列，尤其是G（不能有4个连续的G）
5， 将引物和探针互相进行配对检测，以避免二聚体和发卡结构的形成。
b），探针设计指导
1，在设计引物之前设计探针
2，探针的Tm值应在68－70℃之间，如果是目测探针，则要仔细审查GC富含区。
3，探针的5’端要避免有鸟氨酸，5’G会有淬灭作用，即使被切割下来这种淬灭作用也还会存在
4，选择C多于G的链作探针，G的含量多于C会降低反应效率，这时就应选择配对的另一条链作为探针。
6， 探针应尽可能的短，不要超过30个bp。
7， 检测探针的DNA折叠和二级结构。
荧光定量PCR服务：
公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。
1、荧光定量PCR服务要求：
（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。
（02）请提供已知的全长基因序列。
（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等
2、荧光定量PCR操作程序
（01）引物（探针）设计与合成。
（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。
（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。
（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。
3、荧光定量PCR的收费标准：
  我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。
麦芽 Malt 5g
人参皂苷ReGinsenosideRe286-29-620mg
5,7-Diacetoxy-3,4',8-imetxoxyflavone 5,7-DIACETOXY-3,4',8-ImetxOXYFLAVONE 5128-43-8
供前列地尔前列腺素B1140791-200801-20℃，避光见标示量
紫菀酮;shionone 10376-48-4 20mg 订购|咨询
甘露醇 Mannitol 分 子 量：182.1700 CAS编号：87-78-5 分子式：C6H14O6 甘露醇--(Mannitol)的详细信息 操作与贮存：
藤黄科金丝桃属多年生草本植物 Hypericum perforatum L. Protopseudohypericin 原伪金丝桃素 54328-09-5 C30H18O9 人参皂苷Rh
中药对照药材八角茴香120999-200102TLC法鉴别
25-OH-Protopanaxtiol25-羟基-原人参三醇 度：≥97%
桑Morus alba Kuwanol C 桑皮醇 C 123702-94-3 C25H26O6 ≥98%
三尖杉Cephalotaxus founei Wilsonine 台湾三尖杉碱 39024-12-9 C20H25NO4 ≥98.5%
莶精醇"Finqclcohol2940-00-120mg
三茱萸新苷 Cornuside 131189-57-6 20mg HPLC≥98% 用于含量测定
含量测定奥美拉唑101015-200801常温，避光100mg
蟾毒灵;灵 Bufalin 465-21-4 20mg HPLC≥98% 用于含量测定
小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-B1
小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-C4
PTPN2 Others Mouse 小鼠 PTPN2 / TC-PTP (aa 2-314) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
T-47D细胞，管癌细胞 人食管癌细胞,EC871214细胞 大鼠骨肉瘤细胞;UMR-106
人肺成纤维细胞cDNAHPF cDNA
CDH2 Others Human 人 Cadherin-2 / CD325 / CDH2 / NCAD 人细胞裂解液 (阳性对照)
人肾癌Wilms细胞;G401
TNFSF4 Others Cynomolgus 食蟹猴 OX-40L / TNFSF4 人细胞裂解液 (阳性对照)
CL-0441SK-N-BE(2) (人神经母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2
HLF细胞，胚肺细胞 人前列腺上皮细胞,RWPE1细胞 人胚胎肌肉组织来源细胞;CCC-HSM-2
猕猴肺细胞;MML2
TNFRSF21 Others Human 人 DR6 / TNFRSF21 人细胞裂解液 (阳性对照)
跗线螨属通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-B1
小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-C4
PTPN2 Others Mouse 小鼠 PTPN2 / TC-PTP (aa 2-314) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
T-47D细胞，管癌细胞 人食管癌细胞,EC871214细胞 大鼠骨肉瘤细胞;UMR-106
人肺成纤维细胞cDNAHPF cDNA
CDH2 Others Human 人 Cadherin-2 / CD325 / CDH2 / NCAD 人细胞裂解液 (阳性对照)
服务流程:
1.客户认真写好订单，提供待检基因相关信息；
2.签订技术服务合同，支付预付款（30-50%)；
3.设计合成定量PCR引物（或客户提供文献引物委托本公司合成）；
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录；
5.PCR预实验，主要检测引物的特异性和扩增效率；
6.正式定量实验：对所有样品上机检测；
7.实验结果和数据分析，形成报告。