酵母基因组DNA快速提取试剂盒价格_品牌:泽叶生物-丁香通官网

库存：大量

英文名：酵母基因组DNA快速提取试剂盒

保质期：-20℃保存2年

供应商：上海泽叶生物科技有限公司

保存条件：-20℃

规格：盒

酵母基因组DNA快速提取试剂盒

● 裂解液MS中含变性剂，请不要直接接触皮肤。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

●本试剂盒需单独购买试剂：溶壁酶（N9031/N9032）。

产品说明

本产品用于酵母基因组DNA的小量提取。纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从1-5×10⁷的酵母细胞中提取到3-35 μg 超纯基因组DNA（OD_260/280= 1.7-1.9）。

质量控制

提取的酵母基因组DNA质量通过琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切和序列测定分析。

保存条件

蛋白酶K室温运输，于-20℃保存，避免反复冻融。

其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DS和MS中有沉淀，可在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

● 溶壁酶（N9031/N9032）需要客户另行购买。

● 蛋白酶K请单独保存，不要与裂解液MS混合，如果可能，请在加入蛋白酶K混匀后，稍稍静置再加裂解液MS，可以得到更好的裂解效果。

● 应尽量使用新鲜的菌体，确保提取的基因组DNA不被降解。

● 在操作步骤4中，菌体应充分悬浮，不要残留菌块，避免影响溶菌效果。

● 在操作步骤5中，加入无水乙醇后，可能会出现絮状沉淀，应将离心管内的溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中，确保基因组DNA的得率。

● 所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为12,000 rpm（约13,400×g）。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1 向每只1.5 ml离心管中加入酵母细胞液1-5 ml（最多不超过5×10⁷个细胞），12,000 rpm离心1min，尽量去除上清。

● 菌液较多时，可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。

2 向菌体加入600 µl溶壁酶反应缓冲液，200 U溶壁酶，涡旋振匀，30℃消化30min。

● 可根据收集菌体量的不同、菌种的差异，溶壁酶比活的不同，相应调整溶壁酶的用量及消化时间。

3 5,000 rpm离心8-10min，去上清，收集沉淀。向收集到的菌体沉淀中加入200 μl消化缓冲液DS，振荡混匀。

● 如需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml，N9042）溶液，振荡混匀，室温放置5min。

4 加入20 μl蛋白酶K溶液，55℃水浴或金属浴30min。

5 加入220 μl裂解液MS，涡旋振荡混匀，直至形成均一的悬浮液，65℃温浴10min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠，室温放置5min使溶液冷却。

● 加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明酵母细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。

● 如菌体超过1.5 ml，可适当延长温浴时间。

6 加入220 μl无水乙醇，上下颠倒混匀，此时可能出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 若溶液体积大于纯化柱容积（700 μl），可分两次离心。