保质期 :1年
英文名 :Direct Tissue PCR Kit
库存 :大量
供应商 :苏州神洲基因有限公司
保存条件 :-20C
规格 :50/100个反应
GBdirect 动物直接PCR试剂盒可直接萃取并扩增动物基因组DNA片段。动物组织如鱼鳍、小鼠尾/耳、肝脏、果蝇、线虫等经过GBdirect 动物Lysis Buffer处理后可直接用于PCR反应,无需提取其基因组DNA,具有操作简便、稳定性强、适用性广等优点,并有效地克服了传统碱裂法只能扩增小片段基因的局限性,因此可广泛用于快速动物组织PCR检测, STR分子标记分析等。该试剂盒由动物Lysis Buffer A、Lysis Buffer B、2x PCR Premix和HiFi DNA聚合酶所组成。
产品信息:
货号 |
试剂盒组分 |
包装 |
保存 |
GB4200-050 |
动物Lysis Buffer A |
5 ml |
-20℃ |
动物Lysis Buffer B |
0.5 ml |
-20℃ |
2x PCR Premix |
0.65 ml |
-20℃ |
HiFi DNA聚合酶 |
0.1 ml |
-20℃ |
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GB4200-100 |
动物Lysis Buffer A |
10 ml |
-20℃ |
动物Lysis Buffer B |
1 ml |
-20℃ |
2x PCR Premix |
1.3 ml |
-20℃ |
HiFi DNA聚合酶 |
0.2 ml |
-20℃ |
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GB4200-200 |
动物Lysis Buffer A |
20 ml |
-20℃ |
动物Lysis Buffer B |
2 ml |
-20℃ |
2x PCR Premix |
2.6 ml |
-20℃ |
HiFi DNA聚合酶 |
0.4 ml |
-20℃ |
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存储条件:保存于-20℃,有效期6个月,应避免反复冻融。
特色:
1.简单快速: DNA释放仅需20 min 左右。
2.无需提取其DNA:节省时间,成本,劳动。
3.易于自动化:与高通量的基因的工作流程兼容。
4.多重PCR: 可以使用多重PCR 引物,扩增多个DNA序列。
操作流程图:
操作流程
(一)取样 |
1. 用清水冲洗要取样的动物部位,然后用75% 酒精消毒过的干净刀片或剪刀把材料切成碎片,取一小片(相当于1-2颗油菜籽的体积)放入1.5 ml离心管中。请勿过量,不超过5 mg,过量取样会导致裂解不完全,使得基因组DNA产量减少。 2. 常见动物组织的取样标准:
- 鱼组织(鳍、肉、内脏): 2.5-5 mm3 。
- 小鼠:鼠尾≤ 2 mm、鼠耳≤ 2.5 mm2、鼠内脏≤ 5 mm3。
- 果蝇或线虫:5-10只。
3. 为防止样本间的交叉污染,每处理完一个样本后请用75%酒精清洗刀片,然后用干净的纸巾擦干残液。 |
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(二)样本的裂解及PCR反应设置 |
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如需同时处理大量样本, 可先将动物Lysis Buffer A 和 Lysis Buffer B 按 10:1 的比例混合,涡旋均匀,然后将100 μl混合后的 Lysis Buffer AB分别加到每个试管中。根据实验条件不同可采用以下方法: 1. 手工处理: 在含有动物样本的1.5ml离心管中加入100 μl 动物 Lysis Buffer AB,用P1000 的枪头挤压样本30次左右以捣碎动物组织,务必使组织完全破碎成糊状,然后简短离心确保样本处于裂解液中,而非贴在管壁上。或采用 自动研磨仪处理: 首先将含有动物样本和100 μl 混合后的 Lysis Buffer AB 的试管放入自动研磨仪中, 利用钢珠的撞击使核酸高效释放。 |
2.样本的裂解 60℃水浴20分钟,然后90℃水浴10分钟。 |
3.DNA模板的获得: 14,000 rpm 离心2分钟,上清液即是PCR反应所需的DNA模板。 |
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4.PCR反应设置 表一:PCR反应设置
PCR反应成分 |
25 μl体系 |
DNA 模板(μl) |
1 - 3 |
2x PCR Premix(μl) |
12.5 |
HiFi DNA聚合酶(μl) |
2 |
Forward & Reverse Primers (10 μM)(μl) |
0.25 |
ddH2O |
to 25 μl |
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表二:PCR循环设定
温度 |
94℃ |
94℃ |
58℃ |
72℃ |
72℃ |
时间 |
5 分钟 |
45秒 |
45 秒 |
1分钟/1kb |
5 分钟 |
循环 |
1次 |
35次 |
1次 |
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5.实验结果分析 1. 若直接使用未稀释的DNA模板进行PCR反应,发现没有PCR产物或PCR条带出现弥散等现象,建议首先调整DNA 模板用量。例如,使用ddH2O 或TE Buffer(自备)对裂解得到的DNA 模板进行稀释,比例可为1:1或1:2(DNA 模板:稀释液),然后在25 μl PCR体系中分别加入 1 μl、2 μl、3 μl稀释后的DNA模板作为优化条件。 2. 设立阳性及阴性对照反应以发现问题所在。阳性反应可用50ng纯化的动物DNA为模板,阴性反应以ddH2O为模板,引物可采用以前成功扩增的引物。 |
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