ECM Kit(小鼠IgM)

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CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海一研

保存条件 ：低温

规格 ：1盒

中文名称：ECM Kit(小鼠IgM)
英文名称：
产品规格：1盒
发货周期：1～3天
用途：适于一抗为小鼠 IgM的Western Blotting 检测。
保存条件：4℃可保存一年 。
Western Blotting 检测试剂盒内容：
1.封闭试剂：10g 蛋白质干粉(脱脂奶粉)。
2.HRP 标记羊抗小鼠 IgM：亲和纯化抗体，经过人血清吸附以去除交叉抗体。效价 1：2000-10000。
3.ECM 显色剂：总量 100ml。含 A 液 5ml(×20倍)；B 液 5ml(×20倍)。每个试剂盒足够 10 张小膜或800 c ㎡面积的膜显色
工作原理：
蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下 ,向着与其电荷相反的电极移动的现象。根据所采用的支持物不同,可分为：琼脂糖凝胶电
泳、淀粉凝胶电泳、聚丙泳等。其中以酰胺凝胶电泳(PAGE)最广泛。它的优点为：无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,可检出 10-9-10-12mol的样品,凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶。
SDS-PAGE 是最常用的定性分析蛋白质的电泳方式,它根据蛋白分子大小不同，迁移速率的不同而达到分离目的，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。
免疫印迹是将凝胶电泳的高分辨力和免疫化学检测的特异性融为一体。免疫印迹技术首先借助凝胶电泳将蛋白质抗原分离，然后将凝胶中的蛋白质转印到膜上使之成为被分离的一个拷贝。免疫印迹为检测样品中是否存在蛋白的抗原提供一种可靠的方法，该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特异性抗体结合的特性并通过相对迁移率来体现该蛋白的分子量。
如果想要了解样品中是否存在某一抗原，以及该抗原的含量或该抗原多肽链的相对分子质量以及亚型，是否与其他蛋白结合，蛋白质的酪氨酸残基是否发生磷酸化等有关问题均可采用免疫印迹。
免疫印迹包括多个简单步骤，可在一到两天完成，该方法具有高效，简便，灵敏等特点。
实验操作步骤：
1．蛋白质的样品制备：
1)细胞培养蛋白质样品的制备：
1：胰酶消化后裂解：细胞培养至 80%左右密度时，以含 0.25%胰蛋白酶消化,室温，低速离心，弃上清。细胞经预冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根据细胞数量定)反复吹打。
2：皿上直接裂解：细胞培养至 80%左右密度时，细胞经预冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根据细胞数量定)，用细胞刮刀收集，转移至离心管中，反复吹打。
2)组织样品的制备：新鲜组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，按组织净重：裂解液=1：10-20的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆，离心收集上清(如有粘稠物可超声处理)
3)蛋白变性：处理后的样品加入样品缓冲液(按样品浓度 1：1或1：2的比例)混匀，样品置 1000C的水浴箱加热 3-5分钟，10000g 离心 10分钟，取上清液。(样品可立即使用也可以分装冻存，-20℃可稳定保持数月。)
2．SDS-PAGE 电泳：
1)．制 胶：①按比例配制分离胶(丙母液：单体：双体=29：1)，缓缓地摇动溶液，使激活剂混合均匀，将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃极中，再在液面上小心注入一层水或正丁醇，以阻止氧气进入凝胶溶液中，37℃恒温箱中静置 60min。
②同前按比例配制浓缩胶，但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多的氧气。吸去不连续系统中下层分离胶上的水分，以连续平稳的液流注入凝胶溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡，37℃恒温箱中静置60min 以上以保证完全聚合。
2)加 样：依次加入标准品和待分析样品。(加样时间要尽量短，以免样品扩散，可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应。样品一般在 1.0mm 厚的胶 加样 50-100ug/lane)。
3)电 泳：加样完毕，选择适当的电压进行电泳即可。一般采用恒压浓缩胶 55V，分离胶 75V，电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处，即停止电泳。
3．转 膜：蛋白质经 SDS-PAGE 分离后，从凝胶中转移到固相支持物上，常用的支持物有：硝酸纤维膜即 NC 膜(AR0135)或PVDF 膜。Tris/甘氨酸-SDS-PAGE 结束后，取出凝胶，在 Tris/甘氨酸缓冲液中漂洗数秒。蛋白质从凝胶向膜转移的过程普遍采用电转印法，包括湿式电转印和干式电转印。
1)干式电转印：将转印槽阴极平放工作台上，并在上面加三张电转印液浸透的1mm厚的滤纸，将电转印液浸透 0.45μm的N.C 膜放在滤纸上，再将凝胶平放在 N.C 膜上，最后在凝胶上加盖三层电转印液浸透 1mm 厚的滤纸，电流根据凝胶面积按1-2 mA/cm2,接通电源，经 1-1.5 小时电转印。
2)湿式电转印：打开电转印夹，每侧垫上一块专用的用转印液浸泡透的海面垫，再各放三块转印液浸透的滤纸，滤纸与海面垫大小相同或与 NC 膜、凝胶大小相同均可，将凝胶平放在阴极侧滤纸上，最后将 NC 膜平放在凝胶上，按照(-)夹板-海棉-滤纸-胶块-NC 膜-滤纸-海绵-夹板(+)装好,依次除尽每层间气泡，夹好电转印夹。 电泳槽加满预冷电转印液，插入电转印夹，将电泳槽放入冰箱内，连接好电极，接通电流，转印夹的NC 膜应对电泳槽的正极,4℃ 250-300mA,转印 80min(根据分子量不同，转印时间可适当调整)。
4、膜的封闭：漂洗转印膜,室温，3次 x10min,以尽量洗去转印膜上的SDS(以免影响抗体的结合)，放入 0.02M TBS 缓冲液配置的5%脱脂奶粉和 1%的BSA 混合的封闭液内，摇床摇动，室温封闭 2h或4℃过夜。1×TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗10min。
5、抗体杂交：1)封闭后的杂交膜放入杂交袋中，加入用 0.02M TBS 缓冲液配置的2%脱脂奶粉和 1%的BSA 混合的稀释液适当稀释的适当稀释的一抗，4℃孵育过夜或37℃孵育2h，1×TBS-T ，PH7.6洗液洗膜 3次 x10min。(一抗的稀释度，孵育时间，温度与显色强度，背景有直接关系。一般来说，阳性不强时可提高一抗浓度和延长孵育时间，而背景高，非特异性条带多，则降低抗体浓度和孵育时间)。
2)用 0.02M TBS 缓冲液配置的2%脱脂奶粉和 1%的BSA 混合的稀释液适当稀释过氧化物酶标记羊抗小鼠 IgM 孵育膜，20℃-37℃,1.5 小时或4℃过夜，1×TBS-T洗膜 3 x10min。使用说明 
    1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。 
    2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。 
    3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物； 
    4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；   
    5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。  
    6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。

ECM Kit(小鼠IgM) 使用注意事项
1． 微量试剂取用前请离心集液。
2． Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。
3． Propidium Iodide （PI）有毒，操作时请戴手套。
4． 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5． 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
6． 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
DDAH2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
NAIP rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
MYO18B rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
CPB1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
RNF139 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
CXorf36 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
DYDC2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
NOC2L rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
CUL4B rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB包装:100 ul
ESR2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
LLGL1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
ATRN rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
COMP rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
ATAD5 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, WB包装:100 ul
EPHA1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
DesglucohellebrinN-甲基亚氨二乙酸(>98.0%(GC)(T))  分子式：C30H50O  性状：Powder  纯度：98.0%
Polypodine B次氮基三乙酸二钠盐(>99.0%(T))  分子式：C26H30O9  性状：Powder  纯度：96.5%
14β,16β-Dihydroxy-3β-(β-D-glucopyranosyloxy)-5α-bufa-20,22-dienolideN-(2-羧乙基)亚氨基二乙酸(>98.0%(T))  分子式：C32H50O5  性状：Powder  纯度：98.0%
Withanolide S三乙四胺-N,N,N',N'',N''',N'''-六乙酸(>98.0%(T))  分子式：C30H46O4  性状：Powder  纯度：98.0%
Ergosterol glucosideTAN[=1-(2-噻唑偶氮)-2-萘酚](>99.0%(T))  分子式：C29H44O5  性状：Powder  纯度：97.5%
Phyperunolide E二甲基偶氮磺III  分子式：C42H68O13  性状：Powder  纯度：98.0%
Withanolide C偶氮磺III(>90.0%(HPLC))  分子式：C43H72O14  性状：Powder  纯度：98.0%
Physapruin A2-(4-磺基苯偶氮）-1,8-二羟基萘-3,6-二磺酸三钠盐水合物(>95.0%(HPLC))  分子式：C42H68O13  性状：Powder  纯度：98.5%
4β-Hydroxywithanolide E2,2'-二羟基偶氮苯(>98.0%(T))  分子式：C45H74O15  性状：Powder  纯度：98.0%
ECM Kit(小鼠IgM) 中文名称  前列腺癌激活蛋白抗体
别    名  Activated in prostate cancer protein; AIPC; KIAA0300; Likely ortholog of rat plakophilin related armadillo repeat protein interacting PDZ protein antibody PAPIN; PDZ domain containing 2; PDZ domain containing 3; PDZ domain containing protein 2; PDZ domain containing protein 3; PDZD2; PDZK 2; PDZK2; PDZK-2; PDZK 3; PDZK3; PDZK-3; PIN1; Plakophilin related armadillo repeat protein interacting PDZ protein like; Rat plakophilin related armadillo repeat protein interacting PDZ protein like; PDZD2_HUMAN.
浓    度  1mg/1ml
规 格  0.2ml/200μg
抗体来源  Rabbit
克隆类型  polyclonal
交叉反应  Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Horse
产品类型  一抗
研究领域  肿瘤 细胞生物 免疫学 信号转导
蛋白分子量  predicted molecular weight: 310kDa
性    状  Lyophilized or Liquid
免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human PDZK3
亚    型  IgG
纯化方法  affinity purified by Protein A
储 存 液  Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
产品应用   ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:50-200
（石蜡切片需做抗原修复）
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
保存条件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.