文献支持MycAway Plus一步法快速支原体检测试剂盒

产品信息

产品描述

MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit是利用Yeasen独特的等温扩增技术，专门针对细胞培养液中支原体污染的快速检测产品。较以往支原体检测产品（货号：40611），本试剂盒中加入了UDG酶，以便去除含dU的PCR产物气溶胶污染，在极大程度上抑制假阳性反应，提高检测的准确度。而且加入的UDG酶在室温下起作用，且对温度敏感、易于灭活，不影响实验结果。

主要原理是若细胞培养物被支原体污染，支原体DNA的保守序列会被大量、快速地扩增，使反应液由蓝紫色变成天蓝色，结果肉眼可辨，无需电泳。

翌圣MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit可以检测多种支原体，包括细胞培养过程中常见的8种支原体。传统巢式PCR支原体法检测法易受细胞培养上清中抑制物的影响，产生假阴性结果；反应后需开盖电泳检测，增加污染导致的假阳性风险。一步法支原体检测试剂盒完全没有上述缺点，且其检测灵敏度、准确性远远高于PCR法。

产品组分

运输与保存方法

冰袋运输。

-20 °C避光保存，保质期18个月。若较长时间不用，请注意避光保存。

注意事项

1）使用本试剂前请仔细阅读说明书。

2）整个实验，应规范操作，包括反应体系的配制、样本处理及加样。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

1. 支原体待检样本准备

贴壁细胞：直接吸取上清。建议在细胞传代或换液3天以上，且汇合度达到90%左右时取样，此时上清中支原体含量较高，便于检出。
悬浮细胞：500 g离心5 min后，吸取上清。建议在细胞传代或换液3天以上时取样，此时支原体含量较高，便于检出。

2. 反应体系

将MycAwayTM -Color从-20 °C取出，溶解后颠倒混匀，瞬时离心确保所有液体落到管底。根据待检测样品量，配制如下体系（通常实验需要设置阴性对照和阳性对照）：

【*】：B组分为粘稠液体，取样小心枪头粘连。。

3. 加样

待测样品：向其余反应管中加入1 μL待测培养上清；

阴性对照：第一支反应管中不加入任何样品，作为阴性对照；

阳性对照：向最后一个反应管中加入1 μL Positive Control，作为阳性对照。

【注】：1) 如果反应是在水浴锅中进行，则每管加入20 μL矿物油，以防止液体蒸发导致结果的误差。如果反应是在PCR仪中进行，不需要加矿物油。

2）实验室中支原体污染十分常见，鉴于本试剂盒反应灵敏，建议用户在超净台中配制组分，以免出现假阳性结果。

4. 反应条件

加完样后，先将样品在30 ℃放置5 min，再在水浴锅或PCR仪中，恒温63 °C孵育60 min。

【注】：本试剂盒所用酶对温度非常敏感，强烈建议使用PCR仪操作；如用水浴锅，应先加热使其达到规定温度后再反应。温差超过2 °C，将导致扩增效率降低，使阳性反应无法在说明书规定的时间内达到典型的天蓝色。

5. 结果判断

63 °C反应60 min后，立刻取出反应管，放于室温。在光线良好的环境中观察反应结果（建议以白纸为背景）。如果反应液仍为蓝紫色，则判定为阴性；若反应液为天蓝色，则判定为阳性。

【注】：在63 °C反应的时间必须准确计时，超过说明书规定的反应时间可能会出现假阳性。反应管不可开盖，否则会出现气空气中支原体污染反应，出现假阳性的现象。
 

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