干细胞 | 细胞系流式检测

提供商 ：Cas9X | 海星生物

服务名称 ：干细胞 | 细胞系流式检测

规格 ：检测报告

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服务周期：1个月
服务价格：800-5600元（交付报告）


细胞流式检测服务
1. 细胞表面标记检测服务
       流式细胞术（FCM）已广泛地应用于基础研究，并逐步进入临床检测，用流式细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析，可区别多种细胞。细胞表面标记主要包括表面受体和表面抗原，对细胞表面标记的检测已广泛用于基础、临床免疫学研究和患者免疫功能的测定，如对间充质干细胞表面标记检测。
2006年国际细胞治疗协会（ISCT）规定了间充质干细胞的最低鉴定标准：

• 基本条件下贴壁生长
• 表达CD105、CD73、CD90，不表达CD45、CD34、CD14/CD11b、CD79a/ CD19、HLA-DR；
• 体外可以诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞、成软骨细胞。

采用细胞表面标记抗体试剂盒对不同的间充质干细胞进行流式鉴定。
        
图1  Human MSC检测指标分别有CD105（+）、CD29（+）、CD73（+）
CD34（-）、CD45（-）、CD11b（-）、CD44（+）
 

2. 细胞凋亡检测服务：
        细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。通常使用细胞凋亡检测试剂盒，如常见的Annexin V荧光双染法，其检测原理为：
Annexin V/ Annexin A5为胞内蛋白膜联蛋白家族成员，以钙依赖的方式与磷脂酰丝氨酸(PS)结合。PS存在于正常细胞浆膜的内层，但在凋亡早期，膜不对称性丧失，PS易位至细胞表面。荧光标记的 Annexin V可与之特异性结合，表明该细胞为早期凋亡细胞。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现红色荧光。

图2  活细胞比例约88.14%，凋亡早期细胞约1.68%，
凋亡晚期或坏死细胞约2.66%，裸核细胞约7.53%
 

3. 细胞周期检测服务：
        碘化丙啶(Propidium，简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。
        碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。
  
图3  细胞周期拟合图
Cas9X拥有自有流式检测和流式分析分选平台，可以为膜蛋白基因敲除的客户提供膜蛋白流式检测和细胞分选富集服务。

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