微量meRIP-seq

微量meRIP-seq

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提供商 :广州华银康科技有限公司

服务名称 :微量meRIP-seq

规格 :梯度报价

我们的优势
样本要

样本来源:人、大小鼠,其他物种需评估
样本类型:细胞、组织、RNA
样品量:
a) 细胞>5×106
b) 组织>10~20mg
c) RNA:500 ng~20 μg (OD260/280:1.8~2.2; 28S:18S>1,RIN>6.5; RNA无明显降解)
注:具体样本量可根据细胞和组织的RNA得率进行调整;样本处理和寄送条件请咨询当地销售经理。


测序方案
测序平台 测序模式 数据量(/样)
Illumina 平台 PE150 meRIP-seq
10G Total data
对照RNA-seq组
10G Total data


技术流程
 

案例分享

芝加哥大学Chuan He与Yu-Ying He课题组7月3日共同发表在nature communications的重要文章。这篇文章揭示了去甲基化酶FTO的m 6 A-mRNA去甲基化促进黑素瘤生长并降低对抗PD-1阻断免疫疗法的反应。
黑色素瘤是美国最致命的人类癌症之一,虽然抗PD-1阻断免疫疗法使越来越多的黑色素瘤患者受益,然而超过一半的患者对免疫治疗没有持久的反应。过去的研究中,黑色素瘤在分子和细胞水平的研究取得了巨大进展,然而总体而言,我们对黑色素瘤的发展和治疗反应的分子机制的了解仍然有限。
本研究首先发现人黑色素瘤细胞中FTO表达增加,且促进了小鼠黑素瘤的肿瘤发生。FTO敲低后,利用Dot blot发现黑色素瘤细胞系中m6A水平上升,且FTO敲低对细胞的影响能够被METTL3/14敲低遏制,表明FTO功能受m6A修饰调控。利用MeRIP-seq发现,敲除FTO可增加基因5’UTR和3’UTR的甲基化水平,和m6A修饰的基因数。另外MeRIP-seq结合m6A IP qPCR发现,敲除FTO可减少PD-1,CXCR4和SOX10这些黑色素瘤促癌因子的表达,m6A水平上升。qPCR和WB也印证了敲低FTO能降低黑色素瘤细胞中PD-1,CXCR4和SOX10的mRNA和蛋白表达量,同时敲低METTL3 和METTL14可以逆转FTO的功能。FTO是通过自噬和NF-κB途径由代谢饥饿应激诱导表达。敲低FTO促进IFNg刺激下的细胞死亡和生长受阻,使黑色素瘤细胞对干扰素γ(IFNγ)敏感,并使黑色素瘤对小鼠的抗PD-1治疗敏感,表明FTO抑制与抗PD-1阻断剂的组合可能会降低黑色素瘤对免疫疗法的耐药性。

文献来源:
Seungwon Yang. et al. m6A mRNA demethylase FTO regulates melanoma tumorigenicity and response to anti-PD-1 blockade. Nature Communications. (2019) 10:2782.

华银健康高通量测序检测中心

中心定位于科研服务与临床医学转化应用,致力于生物医学各领域的相关研究与测序大数据联合分析,为各大高校、医院和科研单位提供医学科研项目的实验设计、测序方案和数据分析为一体的一站式服务。形成以临床应用为导向的转化医学中心,力争为客户提供专业、快速的临床医学检测服务。
目前,华银高通量检测平台拥有Illumina和Thermo Fisher等高通量测序仪组成的大规模高通量测序服务平台,科研服务可提供涵盖外泌体组学、免疫组学、基因组学、转录组学、微生物组学、蛋白组学和代谢组学等各种测序服务和高级生物信息分析服务;临床检测服务包括遗传性肾病全谱基因检测、临床病原微生物检测、肿瘤分子病理检测等服务。

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