诺如病毒GⅠ型、GⅡ型RNA核酸检测试剂盒(IAC,PCR-荧光探针法)

诺如病毒GⅠ型、GⅡ型RNA核酸检测试剂盒(IAC,PCR-荧光探针法)

价格: ¥5766

品牌:钰博生物/YBscience

货号:YB12172

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英文名 :诺如病毒GⅠ型、GⅡ型RNA核酸检测试剂盒(IAC,PCR-荧光探针法)

保质期 :12 个月

供应商 :上海钰博生物科技有限公司

保存条件 :-20℃条件下保存,有效期1年

规格 :

诺如病毒GⅠ型、GⅡ型RNA核酸检测试剂盒(IAC,PCR-荧光探针法)

诺如病毒 GI 型、GII 型 RNA核酸检测试剂盒(一管式 IAC,PCR-荧光探针法)
◆ 产品说明
诺如病毒 GI 型、GII 型 RNA核酸检测试剂盒(PCR-双色荧光法)参照 GB 4789.42-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》进行设计,可于一个反应中同时检测 GI 型、GII 型诺如病毒;适用于贝类,生食蔬菜,胡萝卜、瓜、坚果等硬质表面食品,草莓、西红柿、葡萄等软质水果等食品中 GI 型、GII 型诺如病毒核酸的检测。 
◆ 产品组成(48 测试)
试剂 含量
A-GIGII 20μL× 7 管× 4 排
IAC-Nor 20μL× 5 管× 4 排
B-Nor 500μL × 1 支
NG-P 100μL × 2 支
PG-Nor 100μL × 1 支
◆ 适用仪器
ABI 系列、MJ 系列、Roche 系列、博日系列以及其它荧光定量 PCR 检测仪(可同时检测 FAM 通道(494 nm)、VIC通道(538nm)两种通道的荧光定量 PCR 仪)。 
◆ 自备耗材和仪器
①冰盒;②移液器(1-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头(RNase free);③离心机;④涡旋混匀器。 
◆ 注意事项
1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
1)第一区:样本制备区。
2)第二区:扩增及产物分析区。
★ 分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。
2.实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。
3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
◆ 试剂盒组分及样品处理说明
(1)样品前处理请参照 GB 4789.42-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》进行样品前处理。
(2)A-GIGII 为 GI、GII 反应液,含有诺如病毒 GI 型、GII 型引物探针。
(3)IAC-Nor 为过程控制反应液,含有过程控制病毒引物探针。
(4)B-Nor 为提取过程控制液,进行样品 RNA 提取时请参照国标法加入 10 μL B-Nor 作为提取过程控制;亦可参照国标法另取 50-100 μL B-Nor,用 PBS 缓冲液补足至 200 μL,进行核酸提取、标准曲线制作及计算提取效率。
(5)NG-P 为阴性对照,也可参照国标法提取阴性样品核酸作为阴性对照进行实验。
(6)PG-Nor 含 GI 型、GII 型诺如病毒核酸,可作为阳性对照,亦可参照国标法作为扩增控制计算抑制指数。
*推荐使用的病毒基因组 DNA/RNA 提取试剂盒中的方案进行病毒 RNA 的提取,或者采用其他等效产品进行 RNA 提取。 
◆ 实验操作(推荐)
请于-20℃条件下保存,有效期 12 个月
1. 反应体系配制(样本制备区)
剪下所需测试数的已含有反应液的 PCR 管,并参照下表进行编号,放置在室温待解冻后,离心 30 秒后揭开封口膜,使用穿刺加样法穿过固封层向每管反应液中分别加入模板。
孔编号 实验意义 反应液 加入模板
A 空白对照 A-GIGII 5μL RNase free water
B 阴性对照 A-GIGII 5μL 阴性对照
C 病毒提取过程控制 1 IAC-Nor 5μL 样品 RNA
D 病毒提取过程控制 2 IAC-Nor 5μL 过程控制病毒 RNA
E 病毒提取过程控制 3 IAC-Nor 5μL 10
-1倍稀释过程控制病毒 RNA
F 病毒提取过程控制 4 IAC-Nor 5μL 10
-2倍稀释过程控制病毒 RNA
G 病毒提取过程控制 5 IAC-Nor 5μL 10
-3倍稀释过程控制病毒 RNA
H 扩增控制 1 A-GIGII 5μL 样品 RNA+1μL 扩增控制 RNA
I 扩增控制 2 A-GIGII 5μL 10
-1倍稀释样品RNA+1μL扩增控制RNA
J 扩增控制 3 A-GIGII 5μL RNase free water+1μL 扩增控制 RNA
K 样品 1 A-GIGII 5μL 样品 RNA
L 样品 2 A-GIGII 5μL 10
-1倍稀释样品 RNA
配制完成后请盖上 PCR 管盖,涡旋混匀并离心后上机反应。
*请参照上表对管进行编号,以免混淆。
2. 扩增反应(扩增及产物分析区)
使用荧光定量 PCR 仪进行检测,编号 A~B,H~L 使用 FAM 和 VIC 通道,编号 C~G 使用 FAM 通道。按下列条件设置扩增反应:
PCR 循环 荧光收集位点
50℃ 10 分钟 1 个循环 —
95℃ 5 分钟 1 个循环 —
95℃ 10 秒
45 个循环
—60℃ 30 秒 ※
◆ 结果判定
1. 实验有效性判定
(1)实验满足:空白对照阴性(A 反应孔);阴性对照阴性(B 反应孔);阳性对照阳性(J 反应孔);否则本次实验无效,请与本公司技术支持联系。
(2)过程控制(C~G 反应孔)需满足:提取效率≥1%;如提取效率<1%,需重新检测;但如提取效率<1%,检测结果为阳性,也可酌情判定为阳性。
(3)扩增控制(H~J 反应孔)需满足:抑制指数<2.00;如抑制指数≥2.00,需比较 10 倍稀释样品的抑制指数;如 10 倍稀释样品扩增的抑制指数<2.00,则扩增有效,且需采用 10 倍稀释样品 RNA 的 Ct 值作为结果;10倍稀释样品扩增的抑制指数也≥2.00 时,扩增可能无效,需要重新检测;但如抑制指数≥2.00,检测结果为阳性,也可酌情判定为阳性。
2. 结果判定
待测样品的 Ct 值大于等于 45 时,判定为诺如病毒阴性;待测样品的 Ct 值小于等于 38 时,判定为诺如病毒阳性;待测样品的 Ct 值大于 38,小于 45 时,应重新检测;重新检测结果大于等于 45 时,判定为诺如病毒阴性;小于等于 38 时,判定为诺如病毒阳性。

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