pHyVec4

pHyVec4

2ug

pHyVec4质粒是使用广泛的基因操作工具，可以进行编码基因、microRNA、lncRNA的功能研究、启动子活性、转录因子及3’UTR调控研究等。


质粒名称：pHyVec4
质粒规格：2ug

实验步骤:
1)质粒提取
1.10,0001min离心收集1.5-5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中
2.加入100溶液1,振荡至彻底悬浮
3.加入200溶液2,立即轻柔颠側离心管6次,使菌体充分裂解,随后将离心管冰上放置
3分钟
4.加入150山溶液3,立即温和颠倒离心管数次,冰上放置3分钟,10,00g离心10mins
5.将步骤4的上清转移至新的离心管(尽量去除杂质),加入等体积的苯酚/氖仿/异成醇混
合均匀10,000离心5min
将步骤5的上清转移至新的离心管,加入2倍体积的无水乙醇,室温放置5-1omin,沉
降DNA
7.10000g离心10分钟,弃乙醇,保留沉淀,加入1ml706的乙醇洗涤沉淀,10,000离
心5分钟
8.倒掉乙醇溶液,用吸水纸吸净管壁上的水珠,室温蒸发痕量乙醇
9.加入适量含 Rnase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA
2)质粒鉴定琼脂糖礙胶电泳
灌胶:胶中加入芡光染料〈 SYBR Green)
加样:质粒+上样緩冲液→混匀
电泳
结果观察:UV灯下

pHyVec4实验分析：
裂解细胞中除含有质粒DNA外,还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂类等物质,因
用碱裂解法除去杂质
1、防止DNA裂解: Solution1
1)、所含糖增加溶洨黏度,維持渗透压,防止DNA受机械剪切作用降解
2)、所含EDTA抑制酶活性
2、溶解与变性: Solution2
1)强碱使质粒DNA和染色体DNA变性
100551-200401    甘草酸二钾    含量测定    100mg
100552-200701    奥美沙坦酯杂质（RNH-6270）    供检查用    50mg
100553-200601    奥美沙坦酯杂质混合物    检查    50mg
100555-200501    尼美舒利    含量测定    100mg
100556-200901    盐酸奥昔布宁    含量测定    100mg
100557-200401    奥扎格雷    UV法含量测定    100mg
100558-200602    盐酸格拉司琼    含量测定    50mg
100559-200301    盐酸昂丹司琼    含量测定    50mg
100560-200301    普罗布考     含量测定    50mg
100561-200401    苄达赖氨酸    UV法含量测定    100mg
100563-200301    盐酸特比萘芬    UV法含量测定    50mg
100564-200301    鞣酸小檗碱    TLC法鉴别    50mg