基因敲除细胞株

 
   

在我们验证基因敲除（KO）细胞株是否建立成功时，除了采用常规的PCR、测序等方法外，蛋白水平的Western blot验证也是一个重要的方法，特别是对于文章发表中结果的呈现，Western blot图尤为重要。但在实际情况中，偶尔也会出现测序鉴定为KO纯合子但WB检测却有条带的现象，即蛋白残留。出现这一情况的原因很复杂，跟gRNA的设计、基因（或mRNA）的可变剪切、WB抗体的选择等因素都密切相关。
  

蛋白检测方法Western blot，是依靠抗原抗体的特异性结合实现的，对于常规蛋白的特异性结合，并不是识别整个目的蛋白，而是识别并结合目的蛋白的某一段氨基酸序列或某一部分功能结构域。因此，我们从商业公司所购买的抗体，若其与目的蛋白结合位置处于敲除位点的前端，便可能会出现抗体与N端残留的蛋白结合，导致WB检测条带的出现，即使此蛋白的功能可能已经丧失。
  

再例如，可变剪切指当某个外显子被破坏或缺失时，其转录的mRNA前体通过不同的剪接方式产生不同的mRNA剪接异构体的过程，是调节基因表达和产生蛋白质多样性的重要机制。当敲除位点处外显子被切割后，包含在内含子中的RNA剪接规则同时被破坏，在一定情况下，缺失的外显子序列在RNA剪切阶段被略过，直接将其上游的外显子与下游的外显子相连，形成一种全新的mRNA，从而继续蛋白质的翻译。
  

由外显子的可变剪切引起的蛋白残留是最为复杂的，其影响因素有很多，包括细胞系的类型，目的基因和细胞的培养环境等。因此，在深入分析了你的基因、细胞信息及敲除方案之前，谁都无法判断、也无法保证你要构建的KO细胞是否会发生蛋白残留。
  

伟人说得好：没有调查研究，就没有发言权。

本着科学严谨的态度，盲目追求蛋白水平的guarantee是不理智的。
虽然蛋白残留问题不常发生，但一旦发生就让人抓狂。
KO细胞蛋白残留，似乎成了个玄学问题？
想要知道盲盒里面是什么，最简单直接的办法就是打开它。
   

赛业生物自主开发细胞基因编辑系统Smart-CRISPR™，是基于人工智能技术所建立的综合算法，通过gRNA设计，结合抗体分析，及阶段性WB测试等策略，为您提供科学的解决方案，让您不再为KO细胞蛋白残留问题而发愁。
  

   
  
服务优势      
  
成功敲除细胞类型精选：
备注：如果您感兴趣的细胞不在我们的精选列表中，请联系我们。

分类	细胞名称	缩写
血液和淋巴系统	小鼠单核巨噬细胞白血病细胞	RAW 264.7
	人B淋巴母细胞	HMy2.CIR
	人T淋巴细胞白血病细胞	HuT 78
	人单核细胞白血病	THP-1
	人慢性髓系白血病细胞	K-562
	人原髓细胞白血病细胞	HL-60
	人白血病T淋巴细胞	Jurkat, Clone E6-1
骨骼、皮肤系统	小鼠黑色素瘤细胞	B16
	小鼠皮肤黑色素瘤细胞	B16-F10
	人骨肉瘤细胞	U-2 OS
	人恶性黑色素瘤细胞	A375
	人纤维肉瘤细胞	HT-1080
消化系统	小鼠结肠癌细胞	CT26.WT
	人回盲肠癌细胞	HCT-8
	人结肠癌细胞	HCT 116
		HT-29
	人结肠腺癌细胞	SW480
	人结直肠癌细胞	LoVo
	人食管鳞癌细胞	KYSE-150
	人胃癌细胞	HGC-27
呼吸系统	小鼠肺癌细胞	LLC
	仓鼠肺细胞	V79
	人正常肺上皮细胞	BEAS-2B
	人大细胞肺癌细胞	NCI-H460
	人非小细胞肺癌细胞	NCI-H1299
		A549
	人肺鳞癌细胞	SK-MES-1
		NCI-H520
泌尿系统	小鼠肾小球系膜细胞	SV40 MES 13
	大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞	PC-12
	大鼠肾细胞	NRK
	非洲绿猴肾细胞	Vero
	恒河猴肾细胞	LLC-MK2
	人膀胱癌细胞	5637
	人前列腺癌细胞	PC-3
	人胚肾细胞	293 Cells, low passage
	人肾细胞腺癌细胞	786-O
		ACHN
脑和神经系统	小鼠垂体瘤细胞	AtT-20
	大鼠胶质瘤细胞	C6
	人胶质瘤细胞	U251
	人神经母细胞瘤细胞	SK-N-SH
内分泌系统	小鼠乳腺癌细胞	4T1
	人乳腺癌细胞	MCF-7
		MDA-MB-231
生殖系统	仓鼠卵巢细胞亚株	CHO-K1
	人宫颈癌细胞	Hela
	人卵巢癌细胞	SK-OV-3
循环系统	小鼠成肌细胞	C2C12
	大鼠成肌细胞	L6
	大鼠心肌细胞	H9c2(2-1)