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文献和实验
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一个基因的表达受多种表达元件调控,有启动子,增强子/沉默子,5’UTR,3’UTR,转录因子,microRNA等,当我们需要验证其具体功能,如启动子的活性,5’UTR和3’UTR是否影响基因的表达,转录因子对启动子是激活还是抑制,microRNA在靶基因3UTR上的结合位点,一段特定序列是否有增强子/沉默子功能时,萤火虫荧光素酶报告基因就是很好的一个用来验证功能的工具。
今天就以pGL3 promoter和pGL3 Basic两个载体来简单说明如何验证这些表达元件的功能,这两个载体都带有萤火虫荧光素酶报告基因,区别是pGL3 promoter在萤火虫荧光素酶报告基因上游有SV40启动子,而pGL3 Basic则只有萤火虫荧光素酶报告基因。请大家一定要注意待研究元件相对于萤火虫荧光素酶基因的位置,位置不同,功能不同。
或者3’UTR构建到pGL3 promoter载体萤火虫荧光素酶报告基因的下游,通过这种结构来预测3’UTR的功能,这里的3’UTR通常都是全长。提供一篇文献Med Sci (Basel). 2017 Dec 22;6(1). pii: E2.The ODC 3'-Untranslated Region and 5'-Untranslated Region Contain cis-Regulatory Elements: Implications for Carcinogenesis参考。
那萤火虫荧光素酶报告基因还有其他用法吗?答案肯定是:当然有!!这些我认为是比较高大上一些,举例:
今天就以pGL3 promoter和pGL3 Basic两个载体来简单说明如何验证这些表达元件的功能,这两个载体都带有萤火虫荧光素酶报告基因,区别是pGL3 promoter在萤火虫荧光素酶报告基因上游有SV40启动子,而pGL3 Basic则只有萤火虫荧光素酶报告基因。请大家一定要注意待研究元件相对于萤火虫荧光素酶基因的位置,位置不同,功能不同。
- 启动子转录活性/转录因子结合位点验证
- microRNA结合位点验证
- 5’UTR和3’UTR功能验证
或者3’UTR构建到pGL3 promoter载体萤火虫荧光素酶报告基因的下游,通过这种结构来预测3’UTR的功能,这里的3’UTR通常都是全长。提供一篇文献Med Sci (Basel). 2017 Dec 22;6(1). pii: E2.The ODC 3'-Untranslated Region and 5'-Untranslated Region Contain cis-Regulatory Elements: Implications for Carcinogenesis参考。
- 增强子/沉默子功能验证
- 效应元件(response element)功能验证
那萤火虫荧光素酶报告基因还有其他用法吗?答案肯定是:当然有!!这些我认为是比较高大上一些,举例:
- 萤火虫荧光素酶报告基因做示踪标记干细胞,将目的基因与萤火虫荧光素酶基因融合融合表达,做成转基因小鼠,进行干细胞移植。
- 用萤火虫荧光素酶报告基因做活体成像来做药效学评价,特别是在抗肿瘤新药研究中应用较多。
- 类似于荧光蛋白,将荧光素酶基因的C端和N端分别连在两个不同的蛋白质上,若两个蛋白质相互作用,则用成像技术研究活体动物体内他们的相互作用。
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