RIPA裂解液套装(强中弱)

库存 ：100

英文名 ：RIPA Lysis Buffer

CAS号 ：无

保质期 ：12个月

供应商 ：上海晅科生物科技有限公司

保存条件 ：-20℃

规格 ：50ml×3

RIPA裂解液套装(强中弱)产品简介：
1. 我们生产的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
2. RIPA即Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
3. RIPA裂解液的主要成分为50mMTris(pH7.4)，150mMNaCl，1%TritonX-100，1%sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑 制剂。可以有效抑制蛋白降解。
4. 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
使用方法:
对于培养细胞样品：
1. 取适当量的 RIPA 裂解液混匀，在使用前数分钟内加入 PMSF（货号 WB0114），使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
2. 对于贴壁细胞，去除培养液用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍，加入适量裂解液，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，轻轻的摇晃约 5-10 分钟，充分裂解后，10000-14000g 离心 10 分钟，取上清，即可进行后续操作。裂解液用量说明： 用于不同规格标准培养板裂解液容量
板规格/表面积 试剂容量
100mm 500-1000μι
60mm 250-500μι
6-well plate 200-400μιper well
24-well plate 100-200μιper well
96-well plate 50-100μιper well
3. 对于悬浮细胞，离心收集细胞，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍，加入适量裂解液，用枪吹打把细胞吹散，用手指轻弹或旋涡震荡 5-10 分钟以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装然后再裂解，充分裂解后，10000-14000g 离心 10 分钟，取上清，即可进行后续操作。
对于组织样品：
1.手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，以清洁表面的血迹，将组织称量后切成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。
2. 取适当量的 RIPA 裂解液混匀，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
3. 按组织净重（g）：裂解液(ml)=1：10 的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液 如果需要高浓度的蛋白样品 可以适当减少裂解液的用量) 。
4. 用匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3- 5 分钟，取上清，即可进行后续作。
注：RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上 清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明 胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。


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