LightShift化学发光EMSA试剂盒

库存 ：99

英文名 ：LightShift™ Chemiluminescent EMSA Kit

供应商 ：上海千曦生物

保存条件 ：-20

规格 ：100 reactions

 

描述

Thermo Scientific LightShift化学发光EMSA试剂盒是一种非常强劲且灵敏的检测系统，通过进行电泳迁移率实验(EMSA)检测蛋白质-DNA结合相互作用。这个试剂盒包括用于建立和定制DNA结合反应的试剂，用于验证体系的一组对照DNA和蛋白提取物，作为探针去识别生物素标记靶DNA的稳定链霉亲和素-HRP偶联物，以及非常灵敏的用于检测的化学发光底物。

LightShift 化学发光EMSA试剂盒的特点：

• 检测胞核抽提物中低丰度蛋白的理想选择
• 灵敏度超越放射性和地GAO辛检测法
• 兼容之前建立的常规DNA-蛋白互作结合条件
• 包括EBNA对照系统，帮助新用户建立一个适当的检测体系，了解用于确定相互作用特异性的方法

LightShift EMSA检测的原理与蛋白免疫印迹类似。生物素末端标记的双链DNA与细胞核提取物或纯化的因子共同孵育，之后进行非变性凝胶电泳。然后将DNA快速（30分钟）转印至带正电的尼龙膜上，进行紫外交联，然后使用HRP标记的链霉亲和素-HRP偶联物检测，再与底物孵育。从标记到获得结果的整个实验流程可以在一天内完成。

蛋白与DNA之间的相互作用对于DNA复制、重组和修复、转录和病毒组装等许多细胞进程具有关键调控作用。电泳迁移率实验(EMSA)是研究基因调控和确定蛋白:DNA之间相互作用的核心技术之一。

EMSA技术基于一个实验发现：即在非变性聚丙xian胺凝胶或琼脂糖凝胶电泳过程中，蛋白:DNA复合物的迁移速度比自由的DNA分子更慢。由于蛋白结合使DNA的迁移速率发生了偏移或延迟，这个方法也被称为凝胶迁移或凝胶阻滞分析。在EMSA技术出现之前，蛋白:DNA之间相互作用主要是通过硝化纤维素膜过滤实验分析。

整个实验中需要实验者准备的是已纯化的末端生物素标记的目标DNA，待检测的蛋白提取物，尼龙膜和基本电泳设备。目标DNA可在合成的同时进行5'或3'端生物素标记，或在合成之后使用Thermo Scientific生物素3'末端DNA标记试剂盒（产品货号89818）进行标记。用户可通过不同方法获得胞核、胞质或全细胞蛋白提取物，包括Thermo Scientific NE-PER 核蛋白和胞质蛋白提取试剂盒（产品货号78833）。

相关资源：

蛋白-核酸相互作用技术指南
蛋白-DNA相互作用检测技术指南
凝胶迁移分析(EMSA)技术指南

相关产品：
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更多产品数据
• 使用Pierce G2快速印迹装置转印EMSA凝胶
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

图表

Chemiluminescent EMSA of four different DNA:protein complexes

Better EMSA results in less time

More sensitive EMSA detection than other gel shift assay methods

EMSA results using the EBNA control system

Procedure summary for the LightShift EMSA Kit

规格

Bulk or Custom Form:	Bulk Custom Form 1
Target Specificity:	Not Target-Specific
Assay Type:	EMSA Assay
Detection Method:	Chemiluminescent
For Use With (Equipment):	X-Ray Film, myECL™ Imager
Product Line:	LightShift™
Product Size:	100 reactions
Technique:	Enhanced Chemiluminescence, Gel Shift, Membrane Blot

内容及储存

Sufficient For: 100 binding reactions and detection on 800 cm²of membrane (10 mini-gel blots)
• 10X Binding Buffer, 1 mL (store at -20°C)
• Biotin-EBNA Control DNA, 50 µL (store at -20°C)
• Unlabled EBNA DNA, 50 µL (store at -20°C)
• EBNA Extract, 125 µL (store at -20°C)
• Poly(dl·dC), 125 µL (store at -20°C)
• 50% Glycerol, 500 µL (store at -20°C)
• 1% NP-40, 500 µL (store at -20°C)
• 1 M KCl, 1 mL (store at -20°C)
• 100mM MgCl₂, 500 µL (store at -20°C)
• 200mM EDTA, pH 8.0, 500 µL (store at -20°C)
• 5X Loading Buffer, 1 mL (store at -20°C)
• Stabilized Streptavidin-HRP, 1.5 mL (store at 4°C)
• Luminol/Enhancer Solution, 80 mL (store at 4°C)
• Stable Peroxidase Solution, 80 mL (store at 4°C)
• Blocking Buffer, 500 mL (store at 4°C)
• 4X Wash Buffer, 500 mL (store at 4°C)
• Substrate Equilibration Buffer, 500 mL (store at 4°C)