Tuner（DE3）pLysS感受态细胞

库存 ：97

英文名 ：Tuner（DE3）pLysS Chemically Competent Cell

保质期 ：1年

供应商 ：上海晶抗生物工程有限公司

保存条件 ：低温保存

规格 ：10×100ul/50×100ul

Tuner（DE3）pLysS感受态细胞

Tuner（DE3）pLysS Chemically Competent Cell

产品货号： JK-G8059                     

保存条件： -80℃   

产品规格 :
 

Tuner（DE3）pLysS​	10×100μl
	50×100μl

基因型

F -ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm lacY1 (DE3)pLysS CamR

简要说明

JKBio Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变株，此突变导致IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。将具有氯霉素抗性的pLysS质粒导入Tuner(DE3)细胞中即是Tuner(DE3) pLysS，pLysS表达T7溶菌酶，T7溶菌酶可以与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，非常适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Tuner(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。

注意事项

1. 感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-10 mM均可）。

4. 为获得需要量的蛋白，佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

5. Tuner(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。

操作说明

1. 取100μl冰上融化的Tuner（DE3）pLysS感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。