TOP10 Electro

库存 ：61

英文名 ：TOP10 Electroporation-Competent Cell

保质期 ：1年

供应商 ：上海晶抗生物工程有限公司

保存条件 ：低温保存

规格 ：5×50ul/20×50ul

TOP10 Electro  

TOP10 Electroporation-Competent Cell

产品货号： JK-G87010                   

保存条件： -80℃   

产品规格 :
 

TOP10 Electro	5×50μl
	20×50μl

基因型

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galKrpsL (Strr)endA1 nupG

简要说明

TOP10电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。-JKBioTOP10来源于MC1061菌株， 是目前实验室常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B高度类似 (DH10B为galE15型，而 TOP10为galU 型)。 TOP10 生长速度快 (比DH5α快，但比 Mach1-T1 生长速度慢)， 10小时可见克隆。 recA1和endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒DNA 的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验，具有链霉素抗性。-JKBio-JKBio-TOP10电击感受态细胞经特殊工艺制作pUC19质粒检测转化效率可达1×1010 cfu/μg DNA。

注意事项

1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。-JKBio 

2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。-JKBio 

3. 当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。-JKBio 

4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。-JKBio 

5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。-JKBio 

6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。-JKBio 

7. 入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。-JKBio 

8. 电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。-JKBio 

操作说明

1. 0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。-JKBio 

2. 2.取-80℃保存的TOP10电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。-JKBio 

A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19；-JKBio 

B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，DNA 浓度不超过 100 ng/μl，体积不超过 5 μl/50 μl 感受 态。-JKBio 

3. 用 200 μl 枪头(用刀切除 0.5cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。-JKBio 

4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用 电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。-JKBio 

5. 立即 向电击杯中加入1000 μl不含抗生素的无菌培养基 S.O.C.，混匀后转移到空50ml管中，并用1ml SOC轻柔冲洗电转杯并转移到50ml管中，另补加3ml SOC培养基， 37℃，200 rpm复苏60分钟。-JKBio 

6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大， 若全部涂板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。-JKBio