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文献和实验
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库存 :11
英文名 :Ar.A4 Chemically Competent Cell
保质期 :1年
供应商 : 上海晶抗生物工程有限公司
保存条件 :低温保存
规格 :10×100ul/50×100ul/100×100ul
Ar A4感受态细胞Ar.A4 Chemically Competent Cell
产品货号: JK-G8069
保存条件: -80℃
产品规格 :
Ar A4 | 10×100μl |
50×100μl | |
100×100μl |
基因型
Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)
简要说明
JKBio发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染 大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,胡萝卜,甘草等),同时具有卡那霉素抗性。JKBio生产的Ar.A4化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性)检测,转化效率>104 cfu/μg DNA。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀,务必使质粒快速、均匀分散开,与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量或降低涂板的菌量。
4. Ar.A4具有卡那霉素抗性,不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。
操作说明
1. 取-80℃保存的Ar A4发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,次使用前做预实验确定所加质粒的量)用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀,依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 冰浴中拿出放室温,加入700μl 无抗生素的TY 液体培养基,于 28℃振荡培养 2小时。
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上,倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天
备注
1、农杆菌相关抗生素配方:
抗生素 | 配方 | 原液 |
羧苄青霉素(carb) | 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml |
硫酸卡那霉素(kan) | 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml |
链霉素(strep) | 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml |
利福平(rif) | DMSO溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml |
庆大霉素(gent) | 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 | 20 mg/ml |
2、常用农杆菌抗性:(R:抗;S:敏感。)
农杆菌菌株 | 羧苄青霉素(carb) | 链霉素(strep) | 利福平(rif) | 庆大霉素(gent) | 硫酸卡那霉素(kan) |
AGL-1 | R | S | R | S | S |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
3、TY配方(1L):
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
补水到1L体积,完全溶解后,121度、20分钟高温灭菌
配制1M的氯化钙水溶液,121度、20分钟高温灭菌
每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。
若配制TY固体培养基,则加入15g 琼脂粉。
上海晶抗生物工程有限公司
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