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库存 ：54
英文名 ：EHA105 Chemically Competent Cell
保质期 ：12个月
供应商 ：江西江蓝纯生物试剂有限公司
保存条件 ：避光保存
规格 ：10×100ul/50×100ul/100×100ul
EHA105农杆菌感受态细胞EHA105 Chemically Competent Cell
产品货号： JLC-G040
保存条件： -80℃
产品规格：10×100μl 50×100μl 100×100ul
产品介绍：
基因型 :
C58 (rif R) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) (strepR) Succinamopine
操作说明 :
EHA105菌株由EHA105菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) ，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予EHA105菌株链霉素抗性，适用于水稻、烟草等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率可达104cfu/μg。
操作说明 :
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每100μl感受态加1ug（体积不大于10ul）质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天（当平板只含有50ug/ml kan 时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50ug/ml kan，20ug/ml rif 时，需28℃培养60h；如果使用的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h）。
注意事项 :
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
4. 利福平浓度不应高于25ug/ul，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50ug/ml kan，若所用平板含有20ug/ml rif则转化效率降低到1/2。
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低（可以忽略）。
1、农杆菌相关抗生素配方：
| 抗生素 | 配方 | 原液浓度 | 工作浓度 |
| 羧苄青霉素 (carb) | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/m | 50 μg/ml |
| 硫酸卡那霉素 (kan) | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
| 链霉素 (strep) | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
| 利福平 (rif) | DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
| 庆大霉素 (gent) | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
2、常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
| 农杆菌菌株 | 羧苄青霉素(carb) | 链霉素(strep) | 利福平(rif) | 庆大霉素(gent) | 硫酸卡那霉素(kan) |
| AGL-1 | R | R | R | S | S |
| EHA101 | S | R | R | S | R |
| EHA105 | S | R | R | S | S |
| LBA4404 | S | R | R | S | S |
| GV3101 S | S | R | R | R | S |
3、LB及YEB配方：
| component | LB(液体)/L | LB(固体)/L | component | YEB(液体)/L | YEB(固体)/L |
| Yeast extract | 5 g | 5 g | Yeast extract | 1 g | 1 g |
| NaCl | 10 g | 10 g | 牛肉浸膏 | 5 g | 5 g |
| NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | 蔗糖 | 5 g | 5 g |
| Agar | － | 15 g | MgSO4*7H2O | 0.49 g | 0.49 g |
| NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | |||
| Agar | － | 15 g |
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