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库存 :50
英文名 :EGY48 Chemically Competent Cell
保质期 :1年
供应商 :上海机纯实业有限公司
保存条件 :低温保存
规格 :10×100ul/50×100ul
EGY48酵母感受态细胞EGY48 Chemically Competent Cell
产品货号: JLC-G042
保存条件: -80℃
产品规格 : 10×100μl 50×100μl
产品介绍 :
基因型 :
MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2
简单说明 :
EGY48菌株是Clontech公司开发的LexA 系统酵母双杂实验用菌株,MATa型,可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验;Transformation marker为: his3, trp1, ura3,报告基因为:LEU2;报告基因UAS(上游激活序列)来源于LexA op(x6),只有当Bait和Prey互作时才能启动LEU2表达。EGY48-LexA酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用:pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3,用于表达DNA-BD(来自原核的202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白;
质粒pB42AD的筛选标志为TRP1,用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白;报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3,报告基因为LacZ,报告基因UAS来源于LexA op(x8) ,只有当Bait和Prey互作时才能启动LacZ表达。 High5TM系列EGY48感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,经PGBKT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA 。
操作说明 :
1. 取100 µl冰上融化的EGY48感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,Carrier DNA (95-100度5 min,快速冰浴,重复一次) 10 µl,PEG/LiAc 500µl并吸打几次混匀,30度水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
2. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
3. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 µl 重悬,离心 30s弃上清。
4. ddH2O 50 µl重悬,涂板,29℃培养48-96 h。
Preparation of Media:
YPDA (1L):
Tryptone 20g
yeast extract 10g
0.2% adenine 15ml
补水到 950ml, 用盐酸调PH到 6.5
Agar 20g (for plates only)
121度,15分钟高压灭菌,待培养基温度降到55度时,加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml0.2% adenine(1L)Adenine 2g补水到1L,溶解后高压灭菌或0.22um滤膜过滤除菌
注意事项 :
1. 感受态细胞在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4. EGY48感受态细胞酵母菌株对高温敏感,适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。
5. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆。
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